研究背景:间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)是目前临床最为常见的干细胞之一,最早发现于骨髓,具有干细胞自我更新能力和多向分化潜能的特性。在特定的诱导分化条件下,它不仅可分化为骨细胞,软骨细胞,还可分化为脂肪细胞,甚至是神经元等。由于其具有易于分离扩增、免疫调节、及旁分泌等众多优点,MSCs被认为是目前细胞治疗及组织工程研究中重要的种子细胞。现有研究表明,可以从多种原代组织中成功分离获得MSCs,如脂肪、牙髓、胎盘、脐带等。然而,骨髓和脂肪来源的MSCs都需要通过侵入性的方式来采集,存在病毒及细菌污染的可能,并且其扩增和分化能力会因供者年龄及其身体健康状况而存在较大的异质性。此外,虽然胎儿来源的细胞具有较强的增殖和分化能力,但由于涉及伦理问题,其使用受限。而胎盘与其他组织来源相比,获取更为容易,将医学废弃物重新再利用,病原微生物感染和免疫原性低,并且不受伦理限制。胎盘可分为四个不同层次:羊膜(Amniotic membrane,AM)、绒毛膜平滑肌层(Chorionic membrane,CM),绒毛膜滋养层(Chorionic villi,CV),和蜕膜(Decidual,DC)。已有文献报道了从人胎盘和脐带(Umbilical cord,UC)中分离MSCs的多种方法,但是,其并未对这些方法的优劣性及分离出来的MSCs的生物学特性进行比较,目前仍没有对胎盘不同层次的间质干细胞进行分离的最佳方法。现有报道中常用的有三种分离胎盘间充质干细胞的方法:组织块贴壁法、酶消化法、脐静脉灌注法。我们通过比较相同重量组织能分离获取的原代MSCs的产量和成功率,首次传代时间得出适合不同层次的胎盘的最佳分离方法。此外,我们对这种方法下获得的5种MSCs进行了生物学特性分析,比较了其表面标志物、增殖能力、分化能力,从而选择更为适合临床研究和应用的胎盘间充质干细胞种子。目的:为了更好的评价不同分离方法获得的人胎盘间质干细胞的功能,从而为临床提供更佳的胎盘来源的间质干细胞种子。方法:我们收集了 35例健康产妇的胎盘,利用三种现有方法对胎盘组织进行分离,其中30例,是对其脐带、羊膜、绒毛膜平滑肌层、绒毛膜滋养层、蜕膜同时进行了组织块贴壁法和酶消化法两种不同的培养方法,另外5例使用脐静脉灌注法,分离出胎盘绒毛膜血管间充质干细胞。我们首先对不同的分离方法的分离效率进行了检测,统计分析不同方法的成功效率,产率,平均传代时间;其次,我们对成功分离获得的5种不同组织来源的MSCs的表面标志物、增殖能力、分化能力等生物学特性进行了鉴定和分析。结果:三种方法均可获得MSCs:组织块培养法提取脐带MSCs的成功率最高,达96.67%,酶消化法提取五种不同组织MSCs的成功率均在85%以上;组织块培养法产率:UC>AM>CM>CV>DC,首次传代时间 UCUC>CM>CV>DC,首次传代时间CV