近年来我国的食品安全形势依然严峻,食品安全问题受到社会的高度关注。由微生物污染导致的食物中毒事件频发,微生物污染已成为食品安全首要问题。蜡样芽孢杆菌是一种天然存在于土壤中的革兰氏阳性菌,在自然界中分布广泛。作为一种常见的食源性条件致病菌,蜡样芽孢杆菌可引起以呕吐和腹泻为主要特征的食物中毒。在世界范围内,蜡样芽孢杆菌疫情广泛存在,但因其病症的自愈性与一过性等特点,蜡样芽孢杆菌引起的食物中毒事件被严重低估。在中国大陆常见的细菌性食源性疾病中,由蜡样芽孢杆菌引起的食物中毒事件总量仅次于沙门氏菌。同时,一部分蜡样芽孢杆菌作为益生菌被广泛应用于医疗、畜牧和农业生产等多个领域。因此,急需加强对蜡样芽孢杆菌的流行分布规律及其致病特征进行深入系统地研究。为系统地研究蜡样芽孢杆菌在宿主和环境间流行分布规律,本研究于2013年至2014年间在北京周边奶牛场采集了牛奶样品205份、环境样品101份,并购买国内市售应用于人、动物和植物的蜡样芽孢杆菌益生菌产品15种。共分离到110株蜡样芽孢杆菌属细菌,分离率为34.5%。蜡样芽孢杆菌常见毒力基因nhe、hbl、cytKl和ces的携带率分别为100%、80%、0和0.9%；96.4%的分离株可表达非溶血性肠毒素(Nhe),其中92.7%的菌株表现细胞毒性作用；1株产生呕吐毒素(cereulide)的菌株。药物敏感性试验表明所有分离株均对林可霉素和截短侧耳素类药物耐药,对四环素不敏感率为35.5%,表现多重耐药性的菌株占所有分离株的23.6%。本研究自牛奶样本中分离到一株高表达cereulide的蜡样芽孢杆菌CAU45,该菌株携带毒力基因nhe和ces,但不表达Nhe。CAU45分泌的cereulide为标准株DSMZ 4312的7倍,细胞毒性为其15.3倍。本研究建立了小鼠单次灌胃和兔单次耳缘静脉注射cereulide的两种动物模型。小鼠的中毒症状和肝脏损伤情况随cereulide攻毒剂量的增大而加重,雌性小鼠中毒症状较雄性小鼠更为明显。Cereulide在兔体内毒物代谢动力学研究表明其平均滞留时间为9.6±2.9 h,消除半衰期为10.8±9.1 h,兔在注射cereulide后30 min即可导致肝脏损伤。此外,本研究在兽用益生蜡样芽孢杆菌CAU17中检测到位于可移动元件上的四环素耐药基因tet(45),该基因通过编码特异性外排泵蛋白介导细菌对四环素产生耐药性。通过电转化成功获得携带tet(45)基因的金黄色葡萄球菌RN4220电转子并表现出四环素抗性。CAU17的tetr(45)基因侧翼序列与已报道的其他细菌不同,推测CAU17是在整合酶作用下获得tet(45)基因,从而获得对四环素的耐药性。综上所述,蜡样芽孢杆菌作为条件致病菌对我国的公共卫生安全存在巨大的潜在危害。一方面蜡样芽孢杆菌可产生多种毒素,严重威胁食品安全；另一方面蜡样芽孢杆菌对抗菌药物产生耐药性,携带可转移的耐药基因,会加剧耐药性的传播与扩散。