【摘 要】
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目的:探讨七氟烷预处理对大鼠肢体远端缺血再灌注（IR）所诱发肺损伤的保护作用及其机制。方法:选用28只成年健康雄性SD大鼠,依循数字表法随机将其分为4组,每组7只。假手术组（Sham组）:仅分离出大鼠双侧股动静脉,不夹闭,暴露5小时;肢体远端缺血再灌注组（IR组）:采用夹闭大鼠双侧股动脉3h,再灌注2h的方法制备肢体远端缺血再灌注模型;七氟烷预处理+肢体远端缺血再灌注组（S-IR组）:大鼠预先吸入
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目的:探讨七氟烷预处理对大鼠肢体远端缺血再灌注（IR）所诱发肺损伤的保护作用及其机制。方法:选用28只成年健康雄性SD大鼠,依循数字表法随机将其分为4组,每组7只。假手术组（Sham组）:仅分离出大鼠双侧股动静脉,不夹闭,暴露5小时;肢体远端缺血再灌注组（IR组）:采用夹闭大鼠双侧股动脉3h,再灌注2h的方法制备肢体远端缺血再灌注模型;七氟烷预处理+肢体远端缺血再灌注组（S-IR组）:大鼠预先吸入30min 2.5%七氟烷后,制备下肢缺血再灌注模型;七氟烷预处理假手术组（S-S组）:大鼠预先吸入30min 2.5%七氟烷后,同Sham组操作。实验结束后,收集各组大鼠左心室血液和肺组织,麻醉状态下处死大鼠。观测指标:（1）测定各组大鼠肺组织的湿/干重比（W/D）、总肺含水量（TLW）;（2）光学显微镜下观察各组大鼠肺组织病理变化（HE染色）;（3）酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测各组大鼠肺组织和血清中氧化应激因子脂质氧化（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）含量以反映各组大鼠的氧化应激损伤程度。酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测各组大鼠肺组织和血清中的炎症因子肿瘤坏死因子（TNF）-α、白细胞介素（IL）-1β、IL-6水平以呈现各组大鼠的炎症介质含量;（4）蛋白质印迹法（western blot）检测各组大鼠肺组织中p38丝裂原活化蛋白激酶（p38）、磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶（p-p38）、腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶（p-AMPK）、过氧化物酶体增殖物激活受体-γ共激活因子-1ɑ（PGC-1ɑ）及沉默信息调节因子-1（SIRT1）蛋白的表达水平,使用统计软件分析其是否存在显著性差异。结果:（1）各组大鼠肺组织W/D、TLW水平比较:与Sham组比较,IR组、S-IR组大鼠肺组织W/D、TLW明显升高（P＜0.05）,与IR组比较,S-IR组均有显著降低（P＜0.05）。S-S组与Sham组相比较无统计学意义（P＞0.05）;（2）各组大鼠肺组织病理改变:Sham组肺组织病理切片显示肺泡形态结构正常,肺泡内无炎性细胞浸润,肺泡间隔无液体积聚。S-S组肺组织病理切片显示肺泡结构大致正常,肺泡壁无明显增厚,肺泡间隔亦未发现炎性细胞浸润,提示无明显损伤。IR组与Sham组相比,大鼠肺组织病理切片可见肺泡形态结构破坏严重,广泛的肺泡间隔增厚,肺泡间质充满大量水肿液,其间浸润着大量的炎性细胞。S-IR组与IR组相比,炎性细胞浸润和水肿程度有明显减轻;（3）各组大鼠肺组织和血清中炎症因子及氧化应激因子水平比较:IR组、S-IR组中IL-1β、IL-6、TNF-α及MDA含量均高于Sham组,S-IR组均低于IR组,差异均有统计学意义（P值均＜0.05）;IR组、S-IR组中SOD含量均低于Sham组,S-IR组均高于IR组,差异均有统计学意义（P值均＜0.05）;而S-S组与Sham组间的IL-1β、IL-6、TNF-α、MDA及SOD含量差异均无统计学意义（P值均＞0.05）。（4）各组大鼠肺组织中蛋白表达水平的比较:与Sham组比较,IR组、S-IR组肺组织中p-AMPK、SIRT1及PGC-1ɑ蛋白表达水平显著下降,p-p38蛋白表达水平均明显升高,差异具有统计学意义（P值均＜0.05）;与IR组对比,S-IR组肺组织中p-AMPK、SIRT1及PGC-1ɑ蛋白表达水平明显升高,p-p38蛋白表达水平显著降低,差异具有统计学意义（P值均＜0.05）。S-S组与Sham组中蛋白表达量差异无统计学意义（P＞0.05）。结论:肢体远端缺血再灌注能够导致大鼠产生明显的肺损伤。对于肢体远端缺血再灌注所诱发的肺损伤,七氟烷预处理可起到一定的保护作用,其作用机制可能是通过促进p-AMPK/SIRT1/PGC-1ɑ信号通路及抑制p-p38蛋白表达,进而减轻肺部炎症反应、缓解氧化应激损伤有关。
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