用于ATP和卡那霉素检测的新型核酸适配体电化学传感器

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核酸适配体传感器因高特异性、高灵敏度、经济简便等优势近年来已被运用到越来越多方面的研究和检测中,本论文将基于核酸适配体的电化学传感器应用到对三磷酸腺苷(ATP)和卡那霉素(Kan)的检测中,构建了两种不同的核酸适配体电化学传感器,实现了目标物质的快速、高灵敏度检测。本论文发展了一种基于二价核酸适配体片段信号探针的夹心型电化学传感器。该传感器通过将两个相同的适配体片段与DNA支架链的简单杂交而设计,检测方便且灵敏度高。由于二价协同作用增强了对靶分子的结合能力,因此基于DNA支架组装的二价信号探针与传统的单价信号探针相比,夹心型电化学传感器检测目标分子的信号增益显著增加。实验通过对DNA支架链的互补碱基长度和电化学测试溶液中二价信号探针的浓度的优化,最终获得较高的ATP检测信号灵敏度,检测范围为0.1μM~200μM,线性方程为SI/%=15.99×[ATP/μM]+59.89,R~2=0.9988,检测限为41 nM。基于DNA支架的二价信号探针的夹心型电化学传感器具有高特异性、选择性,适用于真实样品中ATP的检测。由于其设计简单且灵敏度高,基于DNA支架的二价信号探针的概念能为基于核酸适配体片段探针的夹心型电化学传感器用于其他物质的分析提供指导。本论文设计了一种用于卡那霉素(Kan)检测的基于单链适配体信号探针的发夹型核酸适配体电化学传感器。该传感器将修饰在金电极上的标记性单链核酸适配体探针构象变化引发电信号变化的原理应用到卡那霉素的检测当中,并对电化学测试缓冲溶液、核酸适配体探针固定浓度、检测频率进行了优化,建立了快速简便的卡那霉素电化学检测方法。该传感器具有较高的特异性和选择性,检测范围为0.05~10μM,线性方程为SI/%=4.063×[Kan]/μM+6.600,R~2=0.997,回收率较高,可用于实际样品的检测中。
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