原花青素作为一种极具抗氧化性能的天然产物,以其显著的自由基清除能力、广泛的药理活性及优良的安全性,成为了食品、药品及生物医疗研究领域一颗翘楚的明星。国内外对原花青素的提取、测定和开发利用方面都展开了火热地研究,由于原花青素结构组成相对复杂,在所建立的各种检测方法中,仍没有统一的标准,因此限制了原花青素的开发与利用以及市场的规范化管理,所以其定量分析方法的研究需进一步完善;同时,对于其抗氧化性能方面也需更深入地研究及全面地考察。为推进原花青素更加合理有效地开发与应用,本论文旨在建立一种快速定量分析原花青素方法的同时,着重对原花青素体外功效的测定及体内抗氧化功效的确证展开了相关工作。主要内容如下:1.微波快速辅助Porter-HPLC法测定原花青素方法的建立:以Porter法中正丁醇-盐酸和铁盐为反应介质,用微波水解改进原水浴回流水解方式,优化了铁盐催化剂的类型和浓度,微波水解时间,微波反应功率及反应体系中水分含量等条件,改进了样前水解方法再以HPLC法测定原花青素的含量,并与传统水浴回流方法对比。结果表明:在微波反应器640 w功率下75 s即可完成水解反应,在525 nm波长下测定其吸光度值,以外标法建立线性范围为10-150μg/mL的标准线性曲线,相关系数R~2=0.9999,线性良好,检测限和定量限分别为0.53μg/mL与1.61μg/mL。同时针对胶囊、片剂与茶剂三种类型保健品进行实验全面考察了日间与日内的精密度与回收率,RSD%在1.5%-3.1%之间,回收率在91.40-107.43%之间。该法便捷、快速和微量高效适于各类原花青素保健品的定量分析。2.原花青素抗氧化功效体外的测定:选用ABTS、DPPH自由基清除法和邻苯三酚自氧化法对原花青素体外抗氧化性能进行了测定,确定了三种方法自由基清除反应的时间,考察了样品浓度对自由基清除效果的影响。从三种检测方法中发现,在DPPH自由基清除方法测定中,原花青素清除效果最为显著;ABTS自由基清除测定中原花青素与维生素C两者清除效果相差较小;邻苯三酚自氧化法中由于自氧化速率难以控制和把握,操作稳定性较另两种方法差。总之,三种体外抗氧化性检测方法都确证了原花青素显著的体外抗氧化效果。3.原花青素抗氧化功效体内的测定:选定人体内稳定且最具有代表性的DNA氧化损伤标志物之一,8-羟基脱氧鸟苷作为检测对象,建立了HPLC-MS测定尿样中8-羟基脱氧鸟苷的定量分析方法,并采集服用一定时期的原花青素与维生素C+E片剂后人群的尿样,进行批量处理测定其8-羟基脱氧鸟苷的含量。实验选用了90个受试者进行服用相应的保健品片剂,分为三组人群,分别为A:对照组(不服用原花青素片);B:服用葡萄籽片组;C:维生素C+E片组,分别采集3组人群0、3、6个月后的尿样。通过分批收集并检测人体样本尿液中8-羟基脱氧鸟苷含量,最后进行统计分析,结果发现:随着服药时间增长,原花青素药片组与空白对照组及组内自身对照比较中,人体内8-羟基脱氧鸟苷含量都具有显著性差异(P<0.05),从而可推断出原花青素对人体内具有抗氧化功效;从服药组之间比较,服药3个月与6个月后,原花青素组人群8-羟基脱氧鸟苷均值含量均比维生素C+E组要低,且各组比较P<0.05均具有显著性差异,即原花青素的抗氧化效果优于维生素C+E组。