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目的：构建小鼠MafB (v-maf musculoaponeurotic fibrosarcoma oncogene family, protein B)基因重组腺病毒表达载体,阐明MafB 对小鼠破骨细胞分化的影响。并对破骨细胞的分化如何被MafB影响机制作一研究。方法：1.提取小鼠RAW264.7细胞总RNA逆转录为cDNA,以cDNA为模板RT-PCR获得含Sal I /EcoR V双酶切位点的目的基因MafB,经限制性内切酶作用后与穿梭质粒pAdTrack-CMV链接,经酶切鉴定正确的穿梭质粒用Pme I线性化后转化到含pAdEasy-1的大肠杆菌BJ5183菌株中同源重组成腺病毒载体pAd-MafB,经Pac Ⅰ线性化后,在HEK 293细胞中包装腺病毒Ad-MafB,感染小鼠RAW264.7细胞,实验分为空白对照组、空载体组(Ad-GFP组)和过表达组(Ad-MafB组),经RT-PCR和Western blotting检测MafB的表达水平,证明细胞内有无MafB的过表达。2.RT-PCR和Western blotting法检测细胞内过表达MafB对成熟破骨细胞标志物抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate Resistant Acid Phosphatase, TRAP)与组织蛋白酶K(cathepsin K,CTSK)的影响。3.RT-PCR检测过表达MafB时,破骨细胞分化关键因子活化T细胞核因子c1(nuclear factor of activated T cells c1,NFAT c 1)和破骨细胞相关受体(osteoclast-associated receptor,OSCAR)的表达水平。4.经抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色法观察MafB对小鼠可溶性核因子K B受体活化因子配体(receptor activator of NF-κB ligand, sRANKL)诱导破骨细胞分化的影响。5.通过构建小鼠颅骨骨片体外溶骨模型,经电镜扫描分析破骨细胞溶骨特性的变化情况。结果：1.成功构建了重组腺病毒Ad-MafB,可感染小鼠单核/巨噬细胞RAW264.7, RT-PCR和Western blotting结果均显示与空白对照组和Ad-GFP组比较,Ad-MafB组RAW264.7细胞MafB mRNA表达显著增强且蛋白相对表达明显增加(P<0.05)。2.RT-PCR和Western blotting结果表明,与空白对照组和Ad-GFP组比较,Ad-MafB组TRAP及CTSK mRNA表达减弱且蛋白相对转录及翻译水平显著降低(P<0.05)3.通过RT-PCR对破骨细胞分化关键因子分析发现,Ad-MafB组破骨细胞分化的最主要的转录因子NFAT c1及OSCAR表达明显受抑制(P<0.05)。4.TRAP染色,Ad-MafB组TRAP阳性的多核巨细胞明显少于Control组和Ad-GFP组。5.成功构建小鼠颅骨骨片体外溶骨模型,电镜扫描发现在RAW264.7细胞内过表达MafB可抑制其在骨面形成溶骨陷窝。结论：1.成功构建可在小鼠RAW264.7细胞中过表达MafB的重组腺病毒Ad-MafB,并且证实其可抑制破骨细胞标志物TRAP及CTSK的生成。2.破骨细胞的分化程度下降是通过MafB降低关键转录因子NFAT cl活性及抑制OSCAR的激活来实现的。3.通过TRAP染色和电镜扫描发现MafB可降低破骨细胞分化程度并降低其溶骨能力。