目的探讨PBMC母-胎转运与HBV宫内感染的关系,了解其作用的生物学基础；探讨胎盘细胞凋亡对胎盘通透性的影响,了解其与PBMC母-胎转运及新生儿HBV感染的关系；探讨PBMC作为HBV的载体,将孕妇体内HBV转运至胎儿体内导致HBV宫内感染的作用机制。方法1.人群研究连续收集2005年1月至2009年2月间太原市区各省市级医院筛检,并在太原市传染病院(太原市第三人民医院)妇产科进行产前检查并分娩的HBsAg阳性孕妇为研究队列,从产前检查追踪观察至分娩,排除孕期有其他感染性疾病或接受免疫治疗的孕妇,共收集HBsAg阳性孕妇及其新生儿共450对作为研究对象。收集孕妇孕期及产后新生儿的流行病学基线资料；采集孕妇分娩前肘静脉血及其新生儿出生24小时内注射乙肝疫苗和乙肝高效价免疫球蛋白(HBIG)前的股静脉血；无菌条件下采集孕妇足月分娩时胎盘组织。进行下述研究：(1)采用等位基因特异性PCR(As-PCR)法检测HBsAg阳性孕妇及其新生儿PBMC中HUMGSTM1、ACE基因多态性,筛选母亲为GSTM1基因表达型(GSTM1+)和/或为ACE基因杂合子(ID型),且其新生儿为GSTM1基因缺失型(GSTM1-)和/或为ACE基因纯合子(纯合插入Ⅱ型或纯合缺失DD型)者作为信息病例对。将GSTM1和ACE基因作为母亲的特异性等位基因,从信息病例对的新生儿外周血PBMC中检测母亲基因,判定是否发生PBMC母一胎转运。(2)采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测上述方法确定的信息病例对中孕妇及其新生儿外周血HBeAg、HBe-Ab、HBc-Ab及新生儿外周血HBsAg.(3)采用荧光定量聚合酶联反应(Fluorescence Quantitative PCR, FQ-PCR)检测信息病例对中母儿外周血血清、PBMC中HBV DNA含量及PBMC HBV cccDNA含量。(4)采用FQ-PCR检测新生儿PBMC中的母亲信息,用△Ct值(Ct目的基因/Ctβ-globin)表示PBMC母-胎转运量。(5)采用免疫组织化学ABC法检测胎盘组织HBsAg。(6)采用脱氧核苷酸末端转移酶(TdT)介导的核苷酸(dUTP)缺口末端标记法,原位末端标记技术(Tune1法)检测胎盘组织凋亡指数(AI),采用免疫组化SP法检测胎盘组织Caspase3蛋白表达,采用real-time RT-PCR检测胎盘组织Caspase3mRNA表达。(7)采用巢式病例对照研究分析母-胎细胞转运及新生儿PBMC HBV感染复制及宫内感染的危险因素研究。(8)采用免疫荧光双标技术检测PBMC涂片上HBsAg和GST,判断感染HBV的PBMC转运情况。2.体外实验(1)采用100μlHBV DNA含量为5.0×106(copies/ml)的病人血清感染PBMC,用CCK-8试剂盒检测不同共培养时间点12h、24h、48h和72h细胞的生长状况。将共培养的细胞清洗4次,用荧光定量PCR法检测PBMC和洗液中的HBV DNA的含量。(2)在1μm孔径Transwell小室共培养模型中,用流式细胞技术(FACS)检测Transwell小室上室感染HBV的PBMC与Bewo的融合现象。再用8μm孔径Transwell小室共培养模型观察PBMC的迁移,用流式细胞技术(FACS)检测下室中标记有绿色荧光的PBMC。(3)共培养时设立三个组：正常对照组(Bewo)、Bewo+HBV血清共培养组、Bewo+感染HBV的PBMC共培养组,在共培养0h、12h、24h、48h后分别收集各组Bewo细胞,通过流式细胞技术(FACS)检测Bewo的凋亡情况。(4)用FQ-PCR法检测感染HBV的PBMC与Bewo共培养组不同时间点(0h、12h、24h、48h)的Bewo细胞caspases3mRNA的表达情况。(5)用FQ-PCR法检测感染HBV的PBMC与Bewo共培养组下室中的PBMC的HBVDNA和HBV cccDNA含量。3.统计分析资料核实后输入数据库,采用SPSS16.0for windows软件进行统计分析。计数资料采用χ2-test,计算各指标阳性率、χ2值、OR值及其95%可信区间；计量资料采用t检验、方差分析及相关性分析。结果1HBsAg阳性孕妇PBMC母-胎转运与孕妇HBV感染及新生儿HBV感染的关系(1)对连续收集的450对HBsAg阳性孕妇及其新生儿的PBMC采用等位基因特异性PCR检测GSTM1、ACE基因多态性：检出86对母亲GSTM1基因型且其新生儿GSTM1基因型的信息病例对,84对母亲ID基因型且其新生儿II/DD基因型的信息病例对,合计将GSTM1、ACE基因作为母亲的特异性等位基因时,共检出155对信息病例对。(2)孕妇HBsAg、HBeAg双阳性组△Ct值(PBMC转运Ct/β-globin Ct值)低于非双阳性组,但差异无统计学意义(t=0.81,P=0.42)；孕妇大、小三阳组△Ct值(PBMC转运Ct/β-globinCt值)均分别低于非大、小三阳组(t=1.42,P=0.16；t=0.02,P=0.98),但差异均无统计学意义。HBsAg阳性孕妇血清HBV DNA各组△Ct值(PBMC转运Ct/β-globinCt值)差别无统计学意义(F=0.37,P>0.05)。(3) HBsAg阳性孕妇PBMC HBV DNA阳性组△Ct值(PBMC转运Ct/β-globin Ct值)低于阴性组,差异有统计学意义(t=6.42,P=0.00)；HBsAg阳性孕妇PBMC HBV cccDNA阳性组△Ct值(PBMC转运Ct/β-globin Ct值)高于阴性组,差异有统计学意义(t=2.13,P=0.04)。(4)将新生儿血清HBsAg、HBV DNA任一项阳性作为判断新生儿宫内感染的指标,则宫内感染组△Ct值(PBMC转运Ct/β-globin Ct值)高于非宫内感染组,但差异无统计学意义(t=0.34,P=0.73)。将新生儿血清HBsAg、HBV DNA及PBMC HBV DNA任一项阳性作为判断新生儿宫内感染的指标,则宫内感染组ACt值(PBMC转运Ct/β-globin Ct值)低于非宫内感染组,差异有统计学意义(t’=6.25,P=0.00)。2.胎盘HBV感染与HBsAg阳性孕妇母-胎细胞转运及新生儿HBV感染的关系(1)胎盘HBV感染组△Ct值(PBMC转运Ct/β-globin Ct值)高于非感染组,但差异无统计学意义(t=0.38,P=0.70)；胎盘各型细胞HBV感染组ACt值(PBMC转运Ct/β-globin Ct值)除母体面的蜕膜细胞高于非感染组外其它均分别低于非感染组,但差异均无统计学意义(t=0.38,P=0.70；t=0.49,P=0.63；t=0.17,P=0.87；t=1.72,P=0.09)。(2)胎盘HBV感染与新生儿血清HBsAg有关(χ2=4.88,P=0.03)而与新生儿HBV DNA无关(χ2=0.10,P=0.76)。将新生儿血清HBsAg、HBV DNA任一项阳性作为判断宫内感染的标准,胎盘HBV感染组的新生儿HBV宫内感染率高于非胎盘HBV感染组,但差异无统计学意义(χ2=2.71,P=0.10)。胎盘HBV感染与新生儿PBMC HBV DNA、PBMC HBV cccDNA均无关(χ2=1.89、0.76,P=0.17、0.38)。将新生儿血清HBsAg、HBV DNA及PBMC HBV DNA任一项阳性作为判断宫内感染的标准,胎盘HBV感染组的新生儿HBV宫内感染率高于非胎盘HBV感染组,但差异无统计学意义(χ2=2.09,P=0.15)。3.胎盘细胞凋亡与HBsAg阳性孕妇母-胎细胞转运及新生儿HBV感染的关系(1)采用Tunel法检测155例HBsAg阳性孕妇胎盘的凋亡情况。胎盘细胞胞核出现棕黄色颗粒为凋亡阳性信号表达。从母体面至胎儿面的蜕膜细胞(DC)、滋养层细胞(TC)、绒毛间质细胞(VMC)和绒毛毛细血管内皮细胞(VCEC)凋亡指数分别为4.5=3±0.07,5.56±0.06,4.66±0.05,4.05±0.06,合计胎盘细胞凋亡指数为4.75±0.05。凋亡指数在HBsAg阳性孕妇胎盘各层细胞上的分布总体上有统计学差异(F值为102.60,P=0.00),其中以滋养层细胞的凋亡为主,绒毛毛细血管内皮细胞的凋亡少见。采用SNK法进--步比较胎盘各层细胞凋亡指数,结果显示：蜕膜细胞(DC)凋亡指数与滋养层细胞(TC)、绒毛毛细血.管内皮细胞(VCEC)的凋亡指数差异均有统计学意义(P值均小于0.05),DC的凋亡指数低于TC而高于VCEC;TC与DC、VMC及VCEC的凋亡指数差异均有统计学意义,TC的凋亡指数高于DC、VMC和VCEC;DC的凋亡指数低于VMC的凋亡指数,但差异无统计学意义。(2)发生PBMC母-胎转运组的胎盘细胞凋亡指数高于未发生转运组的胎盘细胞凋亡指数,差异有统计学意义(t=3.44,P=0.00)。发生PBMC母-胎转运组的胎盘各层细胞凋亡指数均高于未发生转运组,差异均有统计学意义(t=2.86,P=0.01；t’=4.86,P=0.00；t=2.53,P=0.01;t=2.23,P=0.03)。(3)将新生儿血清HBsAg、HBV DNA任一项阳性作为判断新生儿HBV宫内感染的标准,宫内感染组的胎盘细胞凋亡指数高于非宫内感染组,但差异无统计学意义(t=1.97,P=0.05)。将新生儿血清HBsAg、HBV DNA和/或PBMC HBV DNA任一项阳性作为判断新生儿HBV宫内感染的标准,宫内感染组的胎盘细胞凋亡指数高于非宫内感染组,差异有统计学意义(t=3.22,P=0.00)。(4)新生儿外周血PBMC HBV DNA阳性组的胎盘蜕膜细胞(DC)、滋养层细胞(TC)的凋亡指数高于阴性组,差异均有统计学意义(t=2.08,P=0.04；t=3.47,P=0.00)。绒毛间质细胞(VMC)、绒毛毛细血管内皮细胞(VCEC)的凋亡指数均高于阴性组,但差异无统计学意义(t’=0.92,P=0.36；t=0.77,P=0.44)。(5)用免疫组织化学SP法检测155例HBsAg阳性孕妇胎盘Caspase3的表达,胎盘细胞细胞浆和/或细胞膜出现棕黄色染色为Caspase3阳性信号表达。从母体面的蜕膜细胞至胎儿面的蜕膜细胞(DC)、滋养层细胞(TC)、绒毛间质细胞(VMC)和绒毛毛细血管内皮细胞(VCEC)Caspase3阳性表达的灰度值分别为98.40±1.86,82.05±1.39,86.41±1.57,89.10±1.70,合计胎盘Caspase3阳性表达的灰度值为88.99±1.47；积分光密度值分别为15.58±0.33,18.59±0.29,17.67±0.31,17.31±0.35,合计胎盘Caspase3阳性表达的积分光密度值为17.29±0.29。Caspase3蛋白在HBsAg阳性孕妇胎盘各层细胞上的分布总体上有统计学差异(F值分别为17.81、15.54,P值均小于0.05)。进一步采用SNK法进行两两比较,结果显示：蜕膜细胞(DC)Caspase3阳性表达的灰度值与滋养层细胞(TC)、绒毛间质细胞(VMC)和绒毛毛细血管内皮细胞(VCEC)的灰度值差异均有统计学意义(P值均小于0.05),DC的Caspase3阳性表达灰度值均高于TC、VMC和VCEC, TC的Caspase3灰度值最小,即TC凋亡率最高,其次VMC、VCEC,DC凋亡率最低；TC与VMC、VMC与VCEC的Caspase3阳性表达的灰度值差异均无统计学意义。DC Caspase3阳性表达的积分光密度值与TC、VMC和VCEC的积分光密度值差异均有统计学意义,DC的Caspase3阳性表达积分光密度值均低于TC、VMC和VCEC; TC Caspase3阳性表达的积分光密度值与DC、VMC和VCEC的积分光密度值差异均有统计学意义,TC的Caspase3阳性表达积分光密度值均高于DC、VMC和VCEC,即TC凋亡率最高,其次VMC、VCEC,DC凋亡率最低：VMC与VCEC的Caspase3阳性表达的灰度值差异均无统计学意义。(6)发生PBMC母-胎转运组胎盘细胞Caspase3IHC灰度值低于未发生转运组的灰度值,差异有统计学意义(t=2.80,P=0.01)；发生PBMC母-胎转运组胎盘细胞Caspase3IHC积分光密度值高于未发生转运组,差异有统计学意义(t=3.11,P=0.00)。发生PBMC母-胎转运组的胎盘各层细胞Caspase3IHC灰度值均低于未发生转运组,差异均有统计学意义(t=2.99,P=0.00；t=2.75,P=0.01；t=2.04,P=0.04;t=2.23,P=0.03)；发生PBMC母-胎转运组的胎盘各层细胞Caspase3IHC积分光密度值均高于未发生转运组,差异均有统计学意义(t=2.90,P=0.00；t=2.95,P=0.00;t=2.72,P=0.01；t=2.65,P=0.01)。(7)将新生儿血清HBsAg、HBV DNA任一项阳性作为判断新生儿HBV宫内感染的标准,宫内感染组的胎盘细胞Caspase3IHC灰度值低于非宫内感染组,积分光密度值高于非宫内感染组,但差异均无统计学意义(t=1.02,P=0.31；t=1.04,P=0.30)。将新生儿血清HBsAg、HBV DNA和/或PBMC HBV DNA任一项阳性作为判断新生儿HBV宫内感染的标准,宫内感染组的胎盘细胞Caspase3IHC灰度值低于非宫内感染组,但差异无统计学意义(t=1.87,P=0.06)；积分光密度值高于非宫内感染组,差异有统计学意义(t=2.20,P=0.03)。(8)新生儿外周血PBMC HBV DNA阳性组的胎盘蜕膜细胞(DC)、绒毛间质细胞(VMC)及绒毛毛细血管内皮细胞(VCEC)的Caspase3IHC灰度值均低于阴性组,积分光密度值均高于阴性组,但差异无统计学意义(t=1.55,P=0.12；t=1.48,P=0.14;t=1.18,P=0.24；t=1.62,P=0.11；t=0.67,P=0.50；t=0.89,P=0.38)；新生儿PBMC HBV DNA阳性组的胎盘滋养层细胞(TC)的Caspase31HC灰度值低于阴性组,积分光密度值高于阴性组,差异有统计学意义(t’=2.71,P=0.01；t=2.33,P=0.02)。(9)胎盘组织Caspase3mRNAACt值(CtCaspase3/CtGAPDH值)与胎盘组织凋亡指数(AI)、Caspase3免疫组化积分光密度值(iod)均呈负相关(r=-0.66,P=0.00；r=-0.18,P=0.03),与胎盘组织Caspase3免疫组化灰度值(gray)量止相关(r=0.23,P=0.00)。(10)发生PBMC母-胎转运组胎盘组织Caspase3mRNA的△Ct值(CtCaspase3/CtGAPDH值)低于未发生转运组的△Ct值,差异有统计学意义(t=3.86,P=0.00)。(11)将新生儿血清HBsAg、HBV DNA任一项阳性作为判断新生儿HBV宫内感染的标准,宫内感染组的胎盘组织Caspase3mRNA的ACt值(CtCaspase3/CtGAPDH值)低于非宫内感染组,但差异无统计学意义(t=0.45,P=0.66)。将新生儿血清HBsAg、HBV DNA和/或PBMC HBV DNA任一项阳性作为判断新生儿HBV宫内感染的标准,宫内感染组的胎盘组织Caspase3mRNA的△Ct值(CtCaspase3/CtGAPDH值)低于非宫内感染组,差异有统计学意义(t=2.46,P=0.02)。4.母-胎细胞转运及新生儿HBV感染的危险因素研究(1)母-胎细胞转运危险因素的分析：孕妇PBMC HBV DNA、胎盘蜕膜细胞Caspase3蛋白水平及胎盘滋养层细胞凋亡指数被引入回归方程,OR值及95%CI分别为：14.60(5.61-38.00)、1.13(1.01-1.27)及4.09(1.898.85),且它们之间均存在交互作用(P值均<0.05,OR95%CI不包括1)。(2)新生儿PBMC HBV DNA阳性危险因素的分析：孕妇PBMC HBV DNA、PBMC母-胎转运被引入回归方程,OR值及95%CI分别为：41.21(11.13-152.64)、17.09(4.91-59.56),且两因素间存在协同交互作用(P值<0.05,OR95%CI不包括1)。(3)新生儿PBMC HBV cccDNA阳性危险因素的分析：孕妇PBMC HBV cccDNA阳性和胎盘凋亡指数被引入回归方程,OR值及95%CI分别为：40.87(9.63-173.41)和0.21(0.07-0.62),两因素间存在交互作用(P值<0.05,OR95%Cl不包括1)。(4)新生儿HBV宫内感染危险因素的分析：将新生儿血清HBsAg、HBV DNA任一项阳性作为判断新生儿HBV宫内感染的标准进行宫内感染危险因素的分析,孕妇HBeAg阳性、分娩方式、胎盘滋养层细胞凋亡指数和孕妇年龄被引入回归方程,OR值及95%CI分别为：3.42(1.28-9.12)、0.33(0.12-0.95)、2.14(1.14-4.04)和0.87(0.77-0.99),交互作用分析显示除分娩方式和胎盘滋养层细胞凋亡指数两因素、胎盘滋养层细胞凋亡指数和孕妇年龄两因素间均无交互作用外(P值均>0.05,OR95%CI不包括1),其它两因素间均存在交互作用(P值均<0.05,OR95%CI不包括1)；将新生儿血清HBsAg、HBV DNA和／或PBMC HBV DNA任一项阳性作为判断新生儿HBV宫内感染的标准进行宫内感染危险因素的分析,孕妇PBMC HBV DNA阳性、PBMC母-胎转运、胎盘滋养层细胞凋亡指数被引入回归方程,OR值及95%CI分别为：6.95(2.71-17.82)、5.82(1.95-17.36)和2.56(1.33-4.91),交互作用分析显示它们之间均存在交互作用(P值均<0.05,OR95%CI不包括1)。5.胎盘细胞凋亡在感染HBV的PBMC母-胎转运中的作用(1)86例新生儿PBMC中检出20例HBsAg阳性者,阳性率为23.3%(20/86),即23.3%的新生儿发生PBMC HBV感染；31例GST阳性者,阳性率为36.0%(31/86),即36.0%的母儿发生了PBMC母-胎转运；HBsAg、GST共存者13例,阳性率为15.12%(13/86),即15.12%的母儿发生了感染HBV的PBMC转运;发生PBMC转运者中有41.94%(13/31)发生了感染HBV的PBMC转运。(2)发生PBMC转运的新生儿发生PBMC HBsAg阳性的危险性是未发生PBMC转运的新生儿的4.952,有统计学意义(x2=9.477,P=0.002)。(3)发生PBMC母-胎转运组的胎盘细胞凋亡指数高于未发生转运组的胎盘细胞凋亡指数,差异有统计学意义(t’=2.38,P=0.02)；且胎盘滋养层细胞的凋亡率高与PBMC转运相关(t=2.75,P=-0.01)。发生PBMC母-胎转运组的胎盘Caspase3蛋白的表达高于未发生转运组,但差异无统计学意义(t=0.23,P=0.82;t=0.98,P=0.33)。发生PBMC母-胎转运组的胎盘Caspase3mRNA的表达低于未发生转运组,但差异无统计学意义(t=1.59,P=0.12)。进一步分析胎盘细胞凋亡与感染HBV的PBMC转运的关系,但未显示感染HBV的PBMC转运与胎盘细胞凋亡率高及胎盘Caspase3蛋白和mRNA的表达有关。(4)新生儿PBMC HBsAg阳性组的胎盘细胞凋亡指数低于阴性组的胎盘细胞凋亡指数,但差异无统计学意义(t=0.34,P=0.74)。新生儿PBMC HBsAg阳性组的胎盘Caspase3蛋白的表达略高于阴性组,但差异无统计学意义(t=0.01,P=0.99；t=0.07,P=0.95)。胎盘Caspase3mRNA的表达与新生儿PBMC HBsAg阳性亦无关(t=0.22,P=0.83)。6.胎盘细胞凋亡在PBMC转运机制中作用的体外研究(1)5×106copies/ml的HBV阳性血清刺激PBMC,共培养12h,24h和48hPBMC的细胞数不断增加,共培养72h左右,细胞数减少。与HBV血.清共培养48h的PBMC发生HBV感染,而清洗细胞的洗液中未检测出HBV DNA。(2)在1μm孔径的Transwell小室共培养模型中Bewo细胞被染上了绿色荧光提示感染HBV的PBMC与Bewo发生了融合。以8μmn孔径的Transwell小室进行细胞迁移试验,下室中检测到标有绿色荧光的PBMC。(3) Bewo与HBV血清和感染HBV的PBMC共培养0h、12h、24h、48h,Bewo+HBV感染组和Bewo+感染HBV的PBMC共培养组的早期凋亡率与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。在共培养Oh、12h,Bewo+HBV感染组和Bewo+感染HBV的PBMC共培养组,Bewo总凋亡率与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);但共培养24h、48h,Bewo+HBV感染组总凋亡率与同期的对照组和Bewo+感染HBV的PBMC共培养组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。分别对同一组内不同时间点的早期和晚期凋亡率进行比较,各组中不同时间点的凋亡率的差异有统计学意义(P<0.05),且随着共培养时间的延长,凋亡率呈现增加的趋势,到48h时HBV感染组总凋亡率达到最高。(4)感染HBV的PBMC与Bewo共培养组不同的时间点Bewo细胞Caspase3mRNA的表达量比较差别有统计学意义(F=38.114,P=0.002),且各组间两两比较后,除12h与0hCaspase3mRNA的相对表达量无差异外,其他各组间差异均有统计学意义。在24h和48h组中,随着时间的延长Caspase3mRNA的相对表达量有升高的趋势。(5)感染HBV的PBMC与Bewo细胞共培养48h时,收集下室的PBMC,其HBV DNA拷贝数为(2.565±0.361)×103copies/ml,同时,在此时间点HBV cccDNA的拷贝数为(1.3550±2.473)×103copies/ml,按判断标准HBV DNA拷贝数≥103copies/ml为阳性,HBVcccDNA拷贝数≥102copies/ml为阳性提示此时间点下室中的PBMC发生感染,且HBV发生复制。结论1.将新生儿血清HBsAg、HBV DNA及PBMC HBV DNA任一项阳性作为判断新生儿宫内感染的指标,即若将新生儿PBMC HBV DNA引入作为宫内感染的判定指标,PBMC母-胎转运与新生儿HBV宫内感染有关。2.胎盘HBsAg阳性与新生儿血清HBsAg有关,而与宫内感染无关。3.胎盘各层细胞均发生凋亡,以滋养层细胞凋亡为主。胎盘细胞凋亡增加与PBMC母-胎转运有关。将新生儿血清HBsAg、HBV DNA任一项阳性作为判断新生儿HBV宫内感染的标准,胎盘细胞凋亡与宫内感染无关。将新生儿血清HBsAg、HBV DNA和/或PBMC HBV DNA任一项阳性作为判断新生儿HBV宫内感染的标准,胎盘细胞凋亡则与宫内感染有关。滋养层细胞凋亡与新生儿PBMC HBV DNA有关。4.孕妇PBMC HBV DNA、胎盘蜕膜细胞Caspase3蛋白表达及胎盘滋养层细胞凋亡指数是母-胎细胞转运的危险因素；孕妇PBMC HBV DNA、PBMC母-胎转运是新生儿PBMC HBVDNA阳性的危险因素；孕妇PBMC HBV cccDNA阳性是新生儿PBMC HBV cccDNA阳性的危险因素,胎盘凋亡指数是新生儿PBMC HBV cccDNA的保护因素；将新生儿血清HBsAg、HBV DNA任一项阳性作为判断新生儿HBV宫内感染的标准进行宫内感染危险因素的分析,孕妇HBeAg阳性和胎盘滋养层细胞凋亡指数是危险因素,而剖宫产和孕妇年龄是保护因素；将新生儿血清HBsAg、HBV DNA和/或PBMC HBV DNA任一项阳性作为判断新生儿HBV宫内感染的标准进行宫内感染危险因素的分析,孕妇PBMC HBV DNA阳性、PBMC母-胎转运及胎盘滋养层细胞凋亡指数是危险因素。5.以检测PBMC中HBsAg作为PBMC HBV感染的指标时,未显示感染HBV的PBMC转运与胎盘细胞凋亡有关。PBMC母-胎转运与新生儿PBMC HBsAg有关。胎盘细胞凋亡与新生儿PBMC HBsAg无关。6.新生儿PBMC HBV DNA阳性可作为HBV宫内感染的诊断标准之一。PBMC可以作为HBV的载体从母体转运至胎儿血循环造成胎儿感染,PBMC母-胎转运可能是HBV宫内感染的另一条感染途径。7.体外模拟胎盘屏障研究胎盘细胞凋亡和感染HBV的PBMC转运的关系,结果显示胎盘凋亡率与感染HBV的PBMC的迁移率正相关,且感染HBV的PBMC转运至Transwell下室后,可感染下室的PBMC,推论若感染HBV的母亲PBMC转运至胎儿血循环会造成胎儿PBMC HBV感染。