胚胎停育,亦称为稽留流产(Missed abortion;MA),在我国的发病率正逐年提升,严重危害了患者的身心健康,而遗传因素是目前国内外学者所公认的导致胚胎停育发生的主要诱因,但其分子机制尚不明确。microRNA作为一种非编码RNA广泛的参与了细胞的增殖、凋亡等胚胎发育的多种生物学过程。为了研究miRNAs与MA发病的相关性,我们利用候选基因法在胚胎停育的胎盘组织中筛选了差异表达的miRNAs,同时配合原位杂交以及real-time PCR两种方法来对筛选出的miRNAs进行验证,结果显示let-7b,miR-21,miR-125b和miR-483在MA患者和孕早期正常绒毛组织中均有广泛的表达,主要分布在滋养层细胞以及间质细胞中。与对照组相比let-7b、miR-125b的表达量显著上调,miR-483的表达量显著下降(p<0.05)。为了进一步探究胚胎停育发生的分子机制,我们利用米非司酮对孕鼠的腹腔进行单次注射来构建胎停动物模型,结果显示当药物浓度达到4mg/kg时,孕鼠胚胎表现为稳定的吸收。与对照组相比,let-7b的表达量上调(p<0.05),这与其在人胎盘组织中的表达趋势一致。我们课题组前期的研究显示let-7b在大鼠胚胎植入后表达显著下调,那么,我们考虑let-7b在胚胎停育组织中表达量上调也可能是引起胚胎停育的原因之一。为此,本研究选择let-7b来深入探讨miRNA参与调控胚胎停育的分子机制。首先,我们分析了 let-7b在不同细胞系中的表达量,为进行细胞功能实验选择细胞系提供参考;然后,利用EdU,MTT,Transwell小室以及流式细胞分析术来研究let-7b的表达量差异对细胞的生物学功能的影响;接着利用生物信息学网站来分析预测let-7b的靶基因。随后利用双荧光素酶报告系统在对靶基因进行验证,最后利用Real-time PCR、Western Blot对靶基因的表达水平进行了探究。研究结果显示,在不同细胞系中let-7b的表达量存在着显著性差异,在滋养层细胞HTR8中let-7b的表达量相对较低,而在人子宫内膜腺癌细胞HEC-1B中表达量有着显著的提高(P<0.01)。利用不同浓度米非司酮处理细胞造成损伤后,发现let-7b的表达量有着显著的上调趋势(P<0.01)。当过表达let-7b时,细胞的增殖能力得到了抑制,而凋亡、迁移及浸润能力得到增强(P<0.05),当敲低let-7b的表达时出现了相反的趋势。双荧光素酶报告系统验证了 MAPK6为let-7b的靶基因,real-time PCR、western blot对MAPK6表达水平进行分析后发现其表达模式与let-7b的相反,提示let-7b可能通过影响了 MAPK6的表达,从而参与调控了胚胎停育的发生过程。结论:Let-7b在胚胎停育患者和米非司酮诱导的胚胎停育模型胎盘组织中均表达显著上调,其可通过靶向调节MAPK6的表达抑制细胞的增殖,促进细胞凋亡、迁移与浸润过程,进而参与了胚胎停育的发生。