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目的:研究ING4(肿瘤生长抑制因子4)和hIL-24(人白细胞介素24)双基因共表达腺病毒载体对A549肺腺癌细胞体外抑癌增效及化疗增敏作用。方法:采用本室已构建的携带ING4/hIL-24双基因共表达的重组复制缺陷型腺病毒载体(Ad-ING4-IRES-IL-24)感染QBI-293A细胞,并用该细胞进行病毒扩增和效价测定,用RT-PCR法鉴定ING4和IL-24基因转录。用50MOI的Ad-ING4-IRES-IL-24作用于体外培养的人肺癌细胞A549和人胚肺成纤维细胞WI-38,用RT-PCR法鉴定目的基因的转录。用MTT法评价Ad-ING4-IRES-IL-24对两种细胞生长的影响,绘制出细胞生长曲线。通过流式细胞术(FCM)和激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)检测Ad-ING4-IRES-IL-24对A549细胞凋亡的影响。免疫细胞化学分析凋亡相关因子Bax,Bcl-2,Caspase3的变化,探讨Ad-ING4-IRES-IL-24诱导肺癌细胞凋亡的主要机理。用Ad-ING4-IRES-IL-24联合化疗药物顺铂(DDP)观察其对肺癌细胞化疗的增敏作用。MTT法检测两者联合作用后对A549细胞的生长抑制作用,流式细胞术检测其凋亡率。激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)检测Ad-ING4-IRES-IL-24联合化疗药物顺铂(DDP)对A549细胞凋亡的影响。结果:Ad-ING4-IRES-IL-24可在QBI-293A细胞中增殖,48h后在倒置显微镜下可见细胞变圆,呈葡萄状聚集,倒置荧光显微镜下可见绿色荧光,呈现高感染效率。RT-PCR检测可见ING4和IL-24基因成功转录。病毒效价检测为108 pfu/ml。Ad-ING4-IRES-IL-24作用A549细胞和WI-38细胞后,RT-PCR结果显示目的基因均可在上述两种细胞中成功转录,并能显著抑制A549细胞的生长,并呈现时间依赖性和剂量依赖性,但对WI-38细胞无明显抑制作用。Ad-ING4-IRES-IL-24感染A549细胞后,其双基因表达对A549细胞的生长抑制作用和诱导细胞凋亡效应明显优于单基因处理组,具抑癌增效功能,其凋亡机制与活化的Caspase3表达水平和Bax/Bcl-2比值升高有关。Ad-ING4-IRES-IL-24联合顺铂(DDP),对A549细胞的生长抑制率和诱导细胞凋亡率均明显优于双基因组和单一DDP化疗组,具有化疗增敏作用。结论:重组腺病毒Ad-ING4-IRES-IL-24具有抑制A549肺癌细胞生长和诱导凋亡的抑癌增效和化疗增敏作用,可能是一种有效的肺癌基因治疗新型载体。