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葡萄卷叶病(Grapevine leafroll disease)是葡萄上一种重要的病毒病,现已研究表明引起该病的病原不止一种,目前国际上承认的已有11种,其中葡萄卷叶伴随病毒-3(GLRaV-3)是最主要的一种。进行病毒脱毒处理、推广无毒化栽培对我国葡萄产业的健康发展具有重要意义。本研究以优良的酿酒葡萄品种蛇龙珠病株为材料,对GLRaV-3检测技术和脱除方法进行了研究。主要研究结果如下:
1.通过对GLRaV-3DAS-ELISA和RT-PCR检测方法的优化,建立了GLRaV-3检测技术体系。
2.对比研究了GLRaV-3 DAS-ELISA和RT-PCR两种检测方法的检测效果。研究结果表明,针对同一感病材料,利用RT-PCR在试验所设的第一次检测时间(6月份)就能检测到该病毒,而DAS-ELISA直到试验所设的第二次检测时间(7月份)才能检测到该病毒,确定RT-PCR法检测的灵敏度高于DAS-ELISA。
3.利用半定量RT-PCR法对比研究了不同部位、不同检测时间对GLRaV-3检测结果灵敏度的影响。研究结果表明,不同部位之间检测灵敏度大小排序为:韧皮部>叶柄>叶片;不同检测时间灵敏度大小排序为:9月>8月>7月>6月。
4.通过对葡萄组织培养过程中培养条件的优化,确定透光、透气性好的封口膜更适于葡萄组织培养容器的封口。在同等培养条件下,健康试管苗的生长势明显优于带毒试管苗,带GLRaV-3的植株生根迟,生长缓慢。
5.对比研究了茎尖培养与热处理结合茎尖培养两种脱毒方法对GLRaV-3的脱除效果。研究结果表明,当茎尖大小为0.2-0.5 mm时,茎尖成活率为40%,茎尖培养脱毒率为30%,有效脱毒率为12%,热处理结合茎尖培养脱毒率为90%,有效脱毒率为36%,茎尖大小为0.8-1.0mm时,茎尖成活率为93.3%,茎尖培养脱毒率为10%,有效脱毒率为9.3%,热处理结合茎尖培养脱毒率为60%,有效脱毒率为56%。热处理结合茎尖培养的脱毒效果明显高于茎尖培养。