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[目的]在人肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)标本中检测癌和癌旁长链非编码 RNA nuclear enriched abundant transcript 1,NEAT1 的表达差异。应用化学合成小干扰RNA(small interfering RNA,si-RNA)抑制两组人肝癌细胞系(HepG2,SMMC-7721)NEAT1的转录,进一步研究NEAT1转录降低后对HCC细胞的表达谱、侵袭和增殖功能的影响。通过RNA免疫共沉淀寻找长链非编码RNANEAT1相关的RNA结合蛋白,并研究这些RNA结合蛋白参与NEAT1调节肝癌相关基因 heterogeneous nuclear ribonucleoprotein A2(hnRNPA2)表达的分子机制,阐述NEAT1调节hnRNPA2的表达对人肝细胞癌的进展的影响,为NEAT1作为分子靶点应用于人肝细胞癌的诊治提供实验依据。[方法]利用Trizol-氯仿提取HCC组织标本癌和癌旁组织,细胞系(HepG2,SMMC-7721)中的 RNA,RT-qPCR 检测各组 NEAT1 表达差异(GAPDH作为内参),使用转染试剂Lipofectamine 2000和siRNANEATl对HepG2和SMMC-7721细胞进行NEAT1敲低,RT-qPCR检测NEAT1敲低效果,并对NEAT1敲低组和对照组细胞进行表达谱测序,检测NEAT1敲低后对HCC细胞各肿瘤相关基因表达的影响,对NEAT1敲低组和对照组细胞进行CFSE标记的细胞增殖检测、CCK8染色的细胞增殖检测、Transwell细胞侵袭移动能力检测来探究NEAT1对HCC细胞增殖和侵袭功能的影响。查询Starbase 2.0数据,寻找与NEAT1相互作用密切的RNA.结合蛋白,通过RNA免疫共沉淀明确能同时与NEAT1和NEAT1所调控基因mRNA相互作用的RNA结合蛋白,RNA pull-down明确RNA结合蛋白与NEAT1作用靶点片段,使用转染试剂Lipofectamine 2000和 siRNANEAT1 对 HepG2 细胞进行 NEAT1 敲低,Western-Blotting,免疫组化验证NEAT1对hnRNP A2蛋白的调节,使用逆转录病毒retroviral vectors作为载体建立hnRNPA2过表达模型并应用于NEAT1低表达的HepG2细胞模型中,CCK8增殖实验和Transwell小室研究NEAT1低表达的HepG2细胞过表达hnRNPA2后与对照组的增殖、侵袭功能。[结果]长链非编码RNANEAT1在HCC细胞和癌组织中表达量高于癌旁组织(p<0.001)。敲低HCC细胞系NEAT1表达导致很多参与肿瘤发生、发展通路的基因表达量改变(229个基因表达上调,148个基因表达下调,表达量改变超过2倍且p<0.05),敲低HCC细胞系NEAT1表达降低了 HCC细胞体外增殖(p<0.01)、侵袭(p<0.001)的能力。U2AF65蛋白能够与NEAT1和hnRNP A2 mRNA相互作用(富集度分别为IgG的82.659倍和53.527倍),NEAT1敲低降低了 hnRNPA2mRNA转录和蛋白表达(p<0.001),这种调控作用可能与NEAT1-U2AF65复合物相关,hnRNPA2过表达可以逆转NEAT1低表达引起的HepG2细胞增殖和侵袭抑制作用(p<0.01)。[结论]NEAT1通过调节hnRNPA2蛋白影响了 HCC细胞的增殖和侵袭能力,这一调节机制可能是人肝细胞癌诊断和治疗的新靶点。