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目的:本文以制何首乌(Radix Po lygoni multiflora praeparata)为研究对象,在制何首乌化学成分的研究基础上,将传统经典方法与现代分析技术相结合,提升制何首乌质量标准,并进行制何首乌饮片质量等级评价标准研究,为制何首乌饮片的质量等级标准制订提供一种新方法、新思路。方法:1.采用正相硅胶、ODS反相硅胶层析法、LH-20凝胶及半制备HPLC等方法对制何首乌70%乙醇提取物的乙酸乙酯部位进行分离,借助LC-MS/MS和核磁共振(NMR)等波谱技术,结合文献报道数据鉴定化合物的结构。2.在制何首乌化学成分研究的基础上,对生何首乌与不同炮制时间制何首乌的性状特征、薄层色谱(TLC)、指纹图谱等进行试验,总结与炮制时间有相关性的化学成分。3.收集广东、贵州、四川、重庆、河南、云南、浙江等7个产区共57批制何首乌饮片样品,进行性状、显微鉴别、薄层鉴别、浸出物检测及含量测定进行研究,新增与炮制时间相关的薄层鉴别及指纹图谱检测方法,采用综合评价模式,建立制何首乌质量等级评价标准。结果:1.从制何首乌饮片中共分离得到19个单体化合物,分别为琥珀酸(Ⅰ),对羟基苯甲醛(Ⅱ),对羟基苯甲酸(Ⅲ),原儿茶醛(Ⅳ),5-羟甲基糠酸(Ⅴ),原儿茶酸(Ⅵ),没食子酸(Ⅶ),2-(2’-羟丙基)-5-甲基-7-羟基色酮(Ⅷ),2-甲基-5-羧甲基-7-羟基色原酮(Ⅸ),大豆苷元(Ⅹ),2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷(Ⅺ),大黄素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷(Ⅻ),大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷(ⅩⅢ),儿茶素(ⅩⅣ),表儿茶素(ⅩⅤ),大黄素甲醚(ⅩⅥ),大黄素(ⅩⅦ),2,5-二甲基-7-羟基色原酮(ⅩⅧ),5-羟甲基糠醛(ⅩⅨ)。化合物(Ⅲ),(Ⅳ),(Ⅴ),(Ⅵ),(Ⅷ)为制何首乌中首次分离得到。化合物(Ⅴ),(Ⅵ),(Ⅶ),(ⅩⅨ)的出现或含量富集与制首乌炮制时间长短相关。2.增补制何首乌质量标准内容:在现行版《中国药典》(一部)制何首乌质量标准基础上,新增以下检测内容:(1)制何首乌饮片的粉末显微特征。(2)新增制何首乌薄层色谱鉴(TLC)别方法:制何首乌粉末1g,70%甲醇为溶剂,超声提取,以GF254薄层板,二氯甲烷-甲酸乙酯-甲酸(8:5:0.4)的下层溶液为展开剂,置紫外灯(254nm)下检视的方法。5-羟甲基糠醛可作为评价制何首乌饮片炮制程度的指标性成分斑点。(3)建立豆制何首乌薄层色谱(TLC)鉴别方法:豆制何首乌粉末1g,以70%甲醇为溶剂,超声提取,以GF254薄层板,二氯甲烷-甲酸乙酯-甲酸(8:5:0.5)的下层溶液为展开剂,喷以1%三氯化铝溶液,在105℃加热,置紫外灯(365nm)下检视的方法。作为豆制何首乌的薄层色谱鉴别方法,大豆苷元斑点可作为指标性成分,可鉴别豆制何首乌与清蒸何首乌。(4)建立了制何首乌HPLC指纹图谱,归属14个共有峰(5-羟甲基糠醛色谱峰缺失的样品指纹图谱归属13个共有峰),指认其中9个色谱峰,建立没食子酸、5-羟甲基糠醛、儿茶素、表儿茶素、二苯乙烯苷、大黄素-8-O-β-D-glc、大黄素甲醚-8-O-β-D-glc、大黄素、大黄素甲醚的含量测定方法,含量范围分别为0.77～2.56 μ g/mg、0.00～3.08μ g/mg、0.43～10.55 μ g/mg、0.66～10.04 μ g/mg、1.19～28.02 μ g/mg、0.15～2.70μ g/mg、0.19～1.71 μ g/mg、0.40～4.14 μ g/mg、0.13～1.88 μg/mg。3.采用建立的制何首乌质量标准,对57批制何首乌样品进行综合评价,其中5批二苯乙烯苷含量、2批游离蒽醌含量低于现行版《中国药典》(一部)(以下简称《药典》)制何首乌项下规定,列为不合格品剔除;其余50批次可分为以下几类:A.指纹图谱与薄层色谱中均检测不到5-羟甲基糠醛,且性状鉴别不符合《药典》描述;B.指纹图谱可检测到微量5-羟甲基糠醛,但薄层色谱中无该成分斑点,且性状鉴别不完全符合《药典》描述;C.指纹图谱与薄层色谱中均可检测到5-羟甲基糠醛,且性状鉴别与《药典》描述相吻合,结合浸出物、二苯乙烯苷和游离蒽醌的含量差异,可分为2个等级。结论:1.制何首乌乙酸乙酯提取部位分离得到的19个化合物中,其中5个化合物(Ⅲ),(Ⅳ),(Ⅴ),(Ⅵ),(Ⅷ)为制何首乌中首次分离得到;化合物(Ⅶ),(Ⅴ),(Ⅵ),(ⅩⅨ)的出现或含量富集与制首乌炮制时间长短相关。结合前期药效研究结果,5-羟甲基糠醛(ⅩⅨ)可作为评价炮制程度的指标成分。化合物(X)为制何首乌炮制辅料黑豆的主要成分大豆苷元,可鉴别豆制何首乌。2.制何首乌饮片质量既与原药材质量相关,亦与炮制工艺相关。本研究在制何首乌化学成分研究的基础上,确定与炮制时间相关的化学成分,并建立检测方法。结合性状与显微鉴别、薄层鉴别、含量测定、指纹图谱等现代分析手段,建立兼顾原药材质量评价和炮制工艺评价的制何首乌饮片质量标准,通过对57批次样本的检测分析和综合评价研究,确定与制何首乌饮片质量等级相关的评价指标,制订各指标限度;建立制何首乌等级评价标准,方法简便、可靠,可为制何首乌质量控制和等级划分提供参考;可用以指导市场中制何首乌饮片药材流通,促进优质优价交易体系的形成。