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系统性红斑狼疮(Systemic lupus erythematosus,SLE)是一种侵犯多系统的,以多器官功能损伤为特征的自身免疫性疾病,狼疮肾炎(Lupus nephritis,LN)是系统性红斑狼疮常见的并发症,也是患者致残的主要病因之一。LN是免疫复合物介导的肾炎,其发病机制尚不确切。目前认为LN的发病机制可能与遗传因素及T细胞、B细胞、单核细胞等多种免疫细胞功能紊乱有关。本课题组前期曾行基因筛查实验发现,TRIM38(tripartite motif-containing 38)m RNA在初治的LN患者外周血中表达水平升高,提示其可能参与了LN的发病过程,但是目前暂无该基因在复发的LN中的表达情况及与LN病情活动度、临床指标等相关性的研究报道。目的:本研究通过实时定量聚合酶链式反应的方法检测复发的LN患者治疗前后外周血中TRIM38 m RNA表达水平变化,观察其与临床指标的相关性,探讨其与LN复发的关系,旨在初步探索TRIM38作为判断LN患者复发、疗效预测的分子标志物的可能性。该项无创性指标的检测,可能对于复发的LN患者的预后和治疗方案的调整具有重大意义。方法:1研究对象及分组收集河北医科大学第二医院风湿免疫科2015年7月至2016年10月住院的复发的LN患者25例临床资料作为治疗前组,14例复发的LN患者接受2周激素及免疫抑制剂治疗作为治疗后组,所有入组患者均符合ACR修订的SLE诊断标准(2009)(附表1),无肝炎、结核等传染性疾病、各种感染性疾病、肿瘤及其他结缔组织病。所有患者治疗前后均进行病情活动度评分(附SLEDAI评分表)。选取32例与患者组年龄、性别相匹配的健康志愿者作为健康对照组。所有患者均经河北医大二院伦理委员会批准并签署书面知情同意书。2研究方法留取所有患者治疗前后清晨空腹外周血,并记录:24小时尿蛋白定量、血尿素氮(Blood urea nitrogen,BUN)、血肌酐(Serum creatinine,Scr)、免疫球蛋白A(Immunoglobulin A,Ig A)、免疫球蛋白G(Immunoglobulin G,Ig G)、免疫球蛋白M(Immunoglobulin M,Ig M)、补体C3、补体C4、甘油三酯(triglyceride,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、总胆固醇(Total bilirubin,TBIL)及其他实验室辅助检查结果。空腹外周血提取总RNA,反转录为c DNA。采用q PCR技术扩增目的基因与内参基因(GAPDH),结果以单个PCR反应达到对数扩增期的循环数(cycle threshold,Ct)来表示。目的基因的Ct值减去GAPDH的Ct值,得到△Ct,基因的表达量由2-△Ct来表示。比较健康对照组、治疗前及治疗后组三组间目的基因表达水平的差异,及其与临床、实验室各项指标的相关性,并分析患者临床指标间的相关性。3统计方法采用SPSS 21.0版统计软件进行统计分析。对所有原始数据进行分析及处理。实验数据符合正态分布,应用均数±标准差(±s)表示,不符合正态分布,应用中位数(四分位数间距)M(QR)表示。两样本计量资料的比较,若符合正态分布且方差齐时采用两独立样本的t检验,若不符合正态分布采用秩和检验(U检验)。多个独立样本比较服从正态分布采用方差分析,不服从正态分布采用秩和检验(H检验)。两变量间的相关性分析采用Pearson相关分析法,不服从正态分布采用Spearman相关分析。为研究基因表达水平的影响因素,采用多元线性回归分析,方法采用逐步回归分析。以α=0.05作为检验水准,P<0.05认为有统计学意义。结果:1健康对照组及患者血液标本提取RNA健康对照组RNA浓度为49.50(50.28),LN患者RNA浓度为84.60(74.06),纯度OD 260nm/280nm的比值约2.08±0.04,采用1%琼脂糖凝胶电泳结果显示18S和28s条带清晰,28S的亮度是18S的2倍左右,说明完整性良好。2 TRIM m RNA的扩增琼脂糖电泳结果显示TRIM38 m RNA条带清晰且为单一条带,与预期大小172 bp相一致。3 TRIM38 m RNA实时荧光定量PCR结果实时荧光定量RCR结果显示扩增良好,融解曲线为单峰,峰值为88.36,电泳结果显示条带单一、大小正确。4 TRIM38 m RNA在健康对照组、复发的LN治疗前组及治疗后组中的表达情况4.1患者无论治疗前0.768(0.690)及治疗后0.587(0.472),其TRIM38m RNA表达水平较健康对照组0.361±(0.603)均升高,三组之间比较有统计学意义(P<0.05)。4.2与健康对照组相比,复发的LN患者在治疗前其TRIM38 m RNA的表达水平显著增加,两组间较有统计学意义(P<0.05)。4.3治疗后,TRIM38 m RNA的表达水平较治疗前减低,但两组间比较无统计学意义(P>0.05)。4.4治疗后,TRIM38 m RNA的表达水平仍高于健康对照组,但无统计学意义(P>0.05)。5 TRIM38 m RNA表达水平与患者临床指标的相关性TRIM38 m RNA表达水平与TG呈正相关(r=0.500,P=0.015),与补体C3呈显著负相关(r=-0.513,P=0.009),与补体C4、SLEDAI评分、24小时尿蛋白定量、BUN、Scr、Ig A、Ig G、Ig M、TC、TBIL无相关性(P>0.05)。6研究基因表达水平的影响因素多元线性回归中采用逐步回归分析显示只有C3进入方程,方程为:2-△Ct=1.143-0.782 C3(P<0.05)。7按照抗ds-DNA抗体水平进行分组,不同抗ds-DNA抗体水平患TRIM38m RNA表达水平的比较采用抗ds-DNA抗体比值取倒数进行分组,不同抗ds-DNA抗体水平的患者TRIM38 m RNA的表达量(0.887±0.714vs0.857±0.339)无显著差异(P>0.05)。8按照24小时尿蛋白水平进行分组,不同尿蛋白水平的患者TRIM38m RNA表达水平的比较不同尿蛋白水平的患者TRIM38 m RNA的表达量(0.763±0.463)vs(0.577±0.302)vs(0.832±0.474)无显著差异(P>0.05)。学意义(P<0.05),Ig A、24小时尿蛋白定量无统计学差异(P>0.05)。9经激素及免疫抑制剂治疗后:SLEDAI评分,BUN、Scr、TBIL有统计结论:1 TRIM38 m RNA在复发的LN患者外周血中表达升高,提示该基因可能参与了LN复发过程,对探索LN的发病机制有重大意义,为LN的治疗提供经验。2 TRIM38 m RNA表达量经激素及免疫抑制剂治疗后下降,但治疗前后并无统计学差异,需扩大样本量进一步研究。3 TRIM38很可能参与了LN的脂代谢异常。4 TRIM38可能与LN复发病情轻重程度无关。