外源因子对罗非鱼消化酶活性和胰蛋白酶mRNA表达的影响

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罗非鱼具有优良的生长特性和饲料利用能力,本文采用酶学和分子生物学的研究技术,对罗非鱼消化酶的特性、分布和活性变化规律以及与外源因子的相互关系进行了系统研究。 以4组(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ)平均体重分别为55.14、122.82、225.68和111.81g的奥尼罗非鱼(Oreochromis niloticus × 0. aureus)研究奥尼罗非鱼消化酶的分布与特性。结果表明,奥尼罗非鱼各消化器官蛋白酶活性均随实验鱼体重增加而上升,肠道蛋白酶活性在体重55g~122g的生长阶段急剧上升,生长后期变化幅度较小。3组实验鱼肠道蛋白酶活性均表现出相似规律:即前肠>中肠>后肠。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组试验鱼肠道各肠段(前肠:中肠:后肠)蛋白酶活性相对比值分别为1:0.66:0.34、1:0.85:0.54、1:0.88:0.74。实验鱼蛋白酶活性相对比值(Ⅰ:Ⅱ:Ⅲ),在胃、肝胰脏、全肠中分别为1:1.86:2.19、1:11.18:23.84、1:3.15:3.58。 奥尼罗非鱼肝胰脏及各肠段淀粉酶、脂肪酶活性均随实验鱼体重增加而上升,实验鱼体重从55g增至122g,酶活性上升较快,实验鱼体重从122g增至255g,酶活性增幅减缓。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组实验鱼肠道淀粉酶、脂肪酶活性均表现出相似规律:即前肠>中肠>后肠,肠道各肠段淀粉酶活性相对比值(前肠:中肠:后肠)分别为1:0.95:0.52、1:0.44:0.21、1:0.50:0.24;脂肪酶相对比值(前肠:中肠:后肠)分别为1:0.17:0.12、1:0.34:0.14、1:0.98:0.64。3组试验鱼淀粉酶活性相对比值(Ⅰ:Ⅱ:Ⅲ)在全肠、肝胰脏中分别为1:8.25:18.94、1:3.43:9.31;脂肪酶活性相对比值(Ⅰ:Ⅱ:Ⅲ)在全肠中为1:3.82:13.09。 奥尼罗非鱼胃蛋白酶、肝胰脏蛋白酶和肠道蛋白酶最适pH分别为2.0、10和9.5~10.5;最适反应温度分别为55℃、60℃和55℃;最适反应底物浓度分别为0.1%、0.08%和0.4%。肠道和肝胰脏淀粉酶最适pH分别为6.5~7和7.5;最适反应溫度均为30℃;最适反应底物浓度均为0.8%。肠道脂肪酶最适pH为7.0~7.5,最适反应温度为35℃。 3组平均体重分别为96.39、96.19和96.99 g的奥尼罗非鱼用于研究饲料成分对奥尼罗非鱼消化酶活性的影响。结果显示,饲料蛋白质水平在20~40%范围变化,肝胰脏和肠道蛋白酶活性变化差异不显著(P>0.05)。随着饲料蛋白水平上升,胃蛋白酶活性分别降低了22.2%和26.0%(P<0.05)。碳水化合物水平由34%上升到42%和50%,肝胰脏淀粉酶活性分别上升了107.1%和106.6%(P<0.01),肠道淀粉酶活性分别提高了67.1%和39.8%(P<0.01)。脂肪水平由1.5%上升到7%,肠道脂外源因子对罗非鱼消化酶活性和胰蛋白酶mRNA表达的影响肪酶活性没有显著变化,脂肪水平升高到12.5%,肠道脂肪酶活性降低了25.4% (只0 .01)。 4组平均体重分别为185.72、181.70、182.81和181.509的奥尼罗非鱼用于研究环境温度对奥尼罗非鱼消化酶活性的影响。4组实验鱼生活水温分别为17℃、22℃、27℃和32℃。结果表明,在22℃、27℃和32℃的饲养水温条件下,相对于17℃而言,胃蛋白酶活性分别提高了1 9.3%、70.7%和84.8%(P<0.05),肝胰脏蛋白酶活性分别提高了46.3%、”.9%和99.6%(P<0.05),肠道蛋白酶活性分别提高了88.0%、156.4%和305.0%(P<0.01),肝胰脏淀粉酶活性分别提高了53.6%、254.6%和321.6%(P<0.01),肠道淀粉酶活性分别提高T 27.7%、69.2%和112.6%(P<0.01),肠道脂肪酶活性分别提高了53.7%、151.8%和196.3%(P<0.01)。 两项实验分别研究了在体外和体内条件下,CuZ‘、FeZ‘和Znz+对奥尼罗非鱼消化酶活性的影响。1组平均体重为In.819的奥尼罗非鱼的用于体外研究,4组平均体重为65.33、65.87、“.55和64.989的奥尼罗非鱼分别用于研究饲料中添加CuZ‘、FeZ‘和znZ+对消化酶活性的影响。实验结果表明,在体外反应条件下添加金属离子,eu,‘、Fe,‘和Zn,‘使胃蛋白酶活性分别提高了65.5%、96.7%和55.1%(声0.01)。CuZ‘和ZnZ+使肝胰脏蛋白酶活性分别提高了1 32.7%和38.1%( P<0.05),但肠道蛋白酶活性分别降低了n.0%和13.8%(P<O.05)。Fe’+对肝胰脏和肠道蛋白酶活性无显著影响(P>0.05)。Cu2+对肠道与肝胰脏淀粉酶活性表现出强烈的抑制效应(P<O.01),Fez+使肠道淀粉酶的活性降低了47.9%(P<0.01),但对肝胰脏淀粉酶的活性无显著影响(P>0.05),Zn2+对肠道与肝胰脏淀粉酶活性均无显著影响(P>0.肠)。饲料中添加Cu补、FeZ‘和ZnZ十对各消化器官中蛋白酶的活性均无显著影响(P>0.05),但能使肝胰脏淀粉酶活性分别提高1 25.3%、215.6%和70.0%(P<0.01),肠道淀粉酶活性分别提高79.8%、74.6%和48.5%(P<0.05)。肠道脂肪酶活性分别提高90.5%、149.8%和84.0%(厂0.01)。 3组平均体重分别为75.91、69.70和70.109的奥尼罗非鱼用于研究饲料中添加外源复合消化酶制剂对奥尼罗非鱼内源消化酶活性的影响。实验结果表明,与对照组比较,饲料中添加1.5%和3.0%的外源复合消化酶制剂,胃、肝胰脏、肠道蛋白酶活性分别升高了22.3%、17.7%、12.5%(P<0.05)和42.0%、25.2%、16.5%(坏0.01),肝胰脏、肠道淀粉酶活性分别升高了62.4%?
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