目的初步建立小鼠精原细胞体外分离、纯化及培养的实验方法,并探讨硫酸镍对小鼠精原细胞的毒作用。方法选择健康昆明种6～8天雄性小鼠,摘取睾丸组织,采用组合酶消化法制备小鼠睾丸细胞悬液,Percoll不连续密度梯度法分离精原细胞,贴壁培养进一步纯化精原细胞,用碱性磷酸酶染色鉴定。分离纯化的精原细胞继续培养,至生长状态良好时,用25、50、100、200、400、800μmol/L硫酸镍染毒,以染毒后6h、12h、24h、36h为观察终点,用MTT法和乳酸脱氢酶(LDH)法检测镍对小鼠精原细胞的毒作用;采用透射电镜观察硫酸镍染毒后精原细胞超微结构的变化。结果用组合酶消化和Percoll不连续密度梯度法,分离6-8d小鼠的精原细胞,可以获得纯度较高、基本满足体外实验要求的精原细胞;MTT结果显示,随着染毒浓度的增加和染毒时间的延长,100μmol/L镍染毒6h细胞生长抑制(P＜0.05),在6h、12h、24h、36h都存在剂量-效应,在25、50、100、200、400、800μmol/L的浓度下都存在时间-效应关系,其染毒24小时IC50为487μmol/L,染毒36小时IC50为423μmol/L。随着染毒浓度的增加和染毒时间的延长,100μmol/L镍染毒6h细胞溶解液LDH活力开始降低(P＜0.05),并呈现出剂量依赖性和时间依赖性;透射电镜可见,精原细胞的超微结构发生了变化,随着染毒剂量和染毒时间的延长,出现细胞皱缩,细胞膜破裂,大量内容物外溢,细胞器严重破坏,结构难以辨认,胞浆出现大量空泡。结论用组合酶消化法和Percoll不连续密度梯度法,分离6-8d小鼠的精原细胞能满足体外实验的需要,且硫酸镍对小鼠精原细胞具有一定的毒作用。