糖尿病是严重威胁人类健康的慢性代谢疾病。胰高血糖素样肽-1（GLP-1）具有降低血糖、恢复胰岛功能、提高外周组织对胰岛素敏感性等诸多功能，是新一代理想的糖尿病治疗药物。本实验室根据天然GLP-1结构，改造其编码序列构建了可以抵抗人体内DPP-Ⅳ切割的口服长效促胰岛素rolGLP-1。　　 本研究采用转座和同源重组两种策略----基于Tn5转座子的转座策略和基于rDNA重组的同源重组策略，构建整合型表达10拷贝rolGLP-1的钝顶螺旋藻株系，为开发降糖螺旋藻口服药物奠定基础。通过反向PCR技术去除自杀性质粒pSZ21上Tn5转座子序列中的抗性基因序列。得到质粒p21GZ。经多次酶切连接构建筛选标记GFP、螺旋藻特异启动子AP、10拷贝rolGLP-1及T7终止子串联构成的GAG表达单元。将GAG表达单元插入p21 GZ上Tn5左臂原卡那霉素抗性基因启动子下游，构建载体p21GZ-GAG。将钝顶螺旋藻培养至指数生长阶段，通过添加EDTA以抑制钝顶螺旋藻中的内切酶活性。通过300w，70s的超声处理获得1～6个细胞的螺旋藻原生质体。随后用质粒p21GZ-GAG对螺旋藻进行转化。转化采用了冰浴转化法、PEG转化法、电转化法多种方法。转化产物接入96孔板培养，荧光显微镜下观察，多次重复试验未观察到发出绿色荧光的转化株。改变Mg2+浓度、转化后培养时间、转化方法和参数后目前尚未检测到转化株。通过定点突变消除GAG表达单元中的BamHI酶切位点，得到mGAG表达单元。再用PCR方法在mGAG表达单元两侧引入酶切位点，将mGAG表达单元插入重组载体pNK中，成功构建重组整合型载体pNK-GAG，其功能验证以及大量转化筛选正在进行。