磷脂的酰化改性及其在肺靶向鱼腥草纳米脂质体传递体中的应用

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鱼腥草挥发油有抗菌、抗病毒、消炎、解热的作用,广泛地运用于临床,常用于治疗肺部疾病,疗效确切。然而,鱼腥草挥发油不稳定,常见的鱼腥草煎服法不但会造成其主要药效成分挥发油的损失,并且由于挥发油难溶于水而降低生物利用度。 脂质体是由磷脂为主要膜材及附加剂分散在水中定向排列而形成的具有单层或复层膜结构的囊泡,它可以分别包封脂溶性和水溶性药物,其结构类似于生物膜。以脂质体为载体制成的脂质体药物具有良好的靶向性,可以提高和延长药物疗效,缓和药物毒性,具有避免耐药性和改变给药途径等优点,连接肺靶向基团则可具有肺靶向功能。因此,利用鱼腥草对肺部作用的特殊性和选择性作用,采用脂质体作为载体制成纳米脂质体药物可开发一种新型中药剂型。 通过正交试验,用浸泡法提取干品鱼腥草中挥发油的实验结果表明,石油醚(第Ⅰ类)浸泡法提取最佳工艺条件为:干品鱼腥草样品用量22.00g/次,干品鱼腥草粉碎粒度50目,浸泡次数2次,每次石油醚用量100ml,每次浸泡时间24h,浸泡温度为室温。在此条件下挥发油提取率达3.145%。GC/MS分析干品鱼腥草挥发油主要成分有23种,未发现鱼腥草素,可确定结构的有17种,质量分数占总出峰量的89.088%。其中甲基正壬酮的质量分数为4.424%,软脂酸和亚油酸的质量分数分别为18.033%和32.515%。 采用逆相蒸发-搅拌超声法制备鱼腥草挥发油纳米脂质体,以包封率为检测指标,优选出制备鱼腥草挥发油纳米脂质体的最佳处方工艺条件为:药物与类脂质量比(W:W)为1:20,胆固醇与磷脂质量比(W:W)为1:10,非离子表面活性剂亲水亲油平衡值为4.3,非离子表面活性剂与类脂质量比(W:W)为1:100,水合介质为蒸馏水,超声频率为35.74KHz,超声乳化时间为15min。用葡聚糖凝胶法检测其包封率,显微镜法观察其形态、粒径和数量。结果表明:逆相蒸发-搅拌超声法制备的脂质体包封率达到97.12%,透射电子显微镜下观察脂质体为粒径均匀的球状或近球状的小单层脂质体,平均粒径为90nm,10d不沉淀。 为了改善脂质体的稳定性,采用单因素试验优选丁二酸酐酰化改性磷脂的最佳工艺条件,以逆相蒸发-搅拌超声法制备丁二酸酐酰化改性脂质体,过柱分离检测鱼腥草挥发油包封率,并在-10℃、40℃和常温下放置24h后,通过离心沉淀测定检测鱼腥草挥发油丁二酸酐酰化改性脂质体的稳定性,透射电子显微镜法观察形态。结果表明:丁二酸酐酰化改性最佳反应温度为60℃、反应时间为120min,并可通过酸酐和磷脂的不同配比以达到不同的酰化率;丁二酸酐酰化改性磷脂制备的纳米脂质体比未改性的稳定,其中酰化率为77%的改性磷脂制备的包封鱼腥草挥发油脂质体的综合性能较好,其平均粒径为97nm,药物包封率达94.77%。 利用丁二酸酐酰化磷脂制备的鱼腥草挥发油纳米脂质体制剂,通过小白鼠尾静脉注射给药0.5h后处死,剖取肺部,组织均浆后提取药物,通过气质联用和抑菌圈法比较脂质体与乳剂给药效果的实验结果表明:鱼腥草挥发油纳米脂质体给药后肺脏提取液中未检出甲基正壬酮,其中亚油酸乙酯的质量分数为0.259%,而鱼腥草挥发油乳剂给药时两者均无,鱼腥草挥发油纳米脂质体给药后肺脏提取液抑菌圈直径可达1.2mm,鱼腥草挥发油乳剂给药时抑菌圈最大仅为0.5mm。由此可得,以逆相蒸发-搅拌超声法制备的鱼腥草挥发油丁二酸酐酰化磷脂纳米脂质体肺靶向给药的效果优于乳剂。
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