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环境雌激素(Environmental Estrogens, EEs)又称环境荷尔蒙,是一类环境内分泌干扰物质,在环境中具有体内雌激素作用(estrogen-like effect)或具有拮抗雄激素效应的化学物质。环境雌激素可通过食物链或直接接触等途径进入人或动物体内,干扰机体内分泌系统,破坏血浆中正常的激素水平,从而对机体的生殖、发育、肿瘤发生、神经系统、免疫系统等产生多方面的影响。环境雌激素分布广泛,种类繁多,不仅影响人类健康,也威胁到生物种族的存亡。即使在极低浓度下也会对生物产生很大的影响。因此,研究环境雌激素的监测分析方法,已经成为国际上环境化学和分析化学的热门课题之一。 本论文建立了几种测定己烯雌酚和雌二醇两种环境雌激素的光度分析新方法,并将其应用于鸡肉、环境水样等实际样品的检测,具体工作如下: 1、金纳米标记增效荧光免疫分析法测定己烯雌酚 利用金纳米标记羊抗兔抗体增效罗丹明6G荧光,建立了荧光免疫分析法测定己烯雌酚的新方法。免疫反应在聚苯乙烯微孔板中以竞争免疫模式进行,首先将己烯雌酚完全抗原固定于微孔板上,与己烯雌酚半抗原一起竞争抗体,再加入金标羊抗兔抗体,与吸附到板子上的抗体结合,然后将纳米金的免疫复合物溶解,最后利用金纳米增效罗丹明6G荧光来间接测出己烯雌酚的浓度。己烯雌酚的浓度在1.0 ng/mL~4000 ng/mL范围内与增效的荧光强度ΔF呈线性关系,检出限为0.49 ng/mL。本法用于水样中己烯雌酚的检测,结果满意。 2、纳米金标记增效荧光免疫分析法测定17β-雌二醇 采用纳米金标记抗体作为免疫分析试剂,运用竞争免疫反应模式,以金纳米增效荧光素钠荧光为检测体系,来间接检测17β-雌二醇,建立了测定17β-雌二醇的新方法。17β-雌二醇的浓度在0.01 ng/mL~100 ng/mL范围内与荧光增强强度呈线性关系,该方法的检出限为9.4 pg/mL,方法灵敏度高,选择性好,线性范围宽,将其应用到水样中雌二醇的检测,结果满意。 3、纳米Fe2O3标记动力学荧光免疫分析法测定己烯雌酚 以纳米三氧化二铁标记抗体作为免疫分析试剂,利用竞争免疫反应模式,以铁催化高碘酸钾猝灭罗丹明B荧光为检测体系,通过测定标记物中铁的含量来间接检测己烯雌酚,建立了测定己烯雌酚的新方法。己烯雌酚的浓度在1.0 ng/mL~2000 ng/mL范围内与荧光猝灭强度呈线性关系,检出限为0.66 ng/mL。该方法灵敏度高,选择性好,线性范围较宽,将其应用到水样中己烯雌酚的检测,结果满意。 4、动力学荧光分析法测定己烯雌酚 基于在酸性介质中,己烯雌酚对羟自由基与吖啶橙氧化还原反应的阻抑作用,建立了动力学荧光法测定己烯雌酚的新方法。该方法简单,快速,线性范围为0.1~50 ng/mL,检出限为0.03 ng/mL。将其用于鸡肉中己烯雌酚的测定,结果满意。 5、顺序注射动力学分光光度法测定痕量己烯雌酚 基于在酸性介质中,己烯雌酚对羟自由基与丁基罗丹明B氧化还原反应的阻抑作用,结合顺序注射进样技术,建立了测定己烯雌酚的新方法。己烯雌酚在5.0~100 ng/mL和100ng/mL~2.0μg/mL范围内与吸光度呈良好的线性关系,方法的检出限为2.15 ng/mL。该方法简单,快速,将其应用于实际水样中的己烯雌酚检测,结果满意。