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莱氏野村菌(Nomuraea rileyi)是一种重要的昆虫病原真菌,特别是对鳞翅目夜蛾科昆虫有着很强的致病力,并且能够引起害虫的田间流行病。该菌具有针对性强,对人畜及其它非靶标昆虫无害,侵染方式独特,不易引起害虫抗药性等特点,在生物防治病虫害方面有着很好的开发价值和应用前景。本文以莱氏野村菌对斜纹夜蛾2龄、4龄幼虫致病力及其毒力差异性因子分析入手,通过观察对比莱氏野村菌在不同龄期斜纹夜蛾幼虫表皮上附着、萌发、形成附着胞的侵染过程,得到体壁分解酶对菌株毒力具有非常重要的影响。将莱氏野村菌几丁质酶及胞外蛋白酶与其毒力进行相关性分析,得到相关性较大的因子作为筛选高毒力菌株的辅助因子。本文旨在为莱氏野村菌的相关研究提供大量的实验数据,明确几丁质酶、蛋白酶等体壁分解酶活性与菌株毒力之间的关系,为有效筛选及利用莱氏野村菌防治斜纹夜蛾提供理论依据。1、通过生物方法测定了4株不同来源的莱氏野村菌分别对斜纹夜蛾2龄、4龄幼虫的致病性,并利用机率值分析法分析实验得到的数据。供试的菌株对试虫均具有很强的致病力,但菌株间毒力存在差异。综合比较僵虫率、校正死亡率及半数致死时间,对2龄斜纹夜蛾幼虫的致病力来说,Nr16菌株的致死效果最好,Nr41次之,Nr15菌株的最弱;对4龄斜纹夜蛾幼虫而言,Nr16菌株的毒力最高,Nr12的毒力次之,Nr15菌株最差。通过对比同一株菌株对不同龄期试虫的致病力指标后发现,各菌株对2龄斜纹夜蛾幼虫的致病力均比4龄幼虫的更强。2、以筛选出的高毒力菌株Nr16菌株为研究对象,通过扫描电镜观察该菌株对2龄、4龄斜纹夜蛾幼虫的侵染过程发现:2龄斜纹夜蛾幼虫体表菌株的孢子无论是附着量,萌发率还是附着胞形成率均比4龄幼虫高;2龄幼虫体表孢子萌发后的芽管穿透体表进入体腔的时间更快;菌株作用于2龄幼虫并令其死亡的时间更短;菌丝体从体腔突破体壁在体表生长繁殖的速度更快。3、本文利用DNS法测定了供试的4株莱氏野村菌菌株的几丁质酶活,实验结果表明,各菌株的几丁质酶活在7.3-8.2 U的范围内。按几丁质酶活大小进行排名得到:Nr16>Nr41>Nr12>Nr15,其中Nr16菌株的几丁质酶活最大为8.1294±0.1728 U,Nr15酶活最低为7.3188±0.8156 U。利用福林酚法测定菌株的蛋白酶活得到,菌株的酶活在1.40-1.57 U范围内,其中Nr15菌株的酶活性最高为1.5664 U,Nr12菌株次之为1.5494 U,其次是Nr41菌株为1.4924 U,Nr16菌株的酶活性最低为1.4375 U。将测得的菌株几丁质酶及蛋白酶酶活与斜纹夜蛾幼虫的半数致死时间进行线性回归分析后得到,菌株的几丁质酶活、蛋白酶活与菌株毒力之间的关系都比较紧密,但几丁质酶活与菌株毒力的回归方程相关系数比蛋白酶的要高,所以选定几丁质酶活性作为菌株毒力生物测定的补充指标。4、将筛选得到的低毒菌株Nr15进行紫外诱变,通过测定初筛得到的20株菌株的几丁质酶,并将其与出发菌株比较后得到:有8株菌株的几丁质酶比出发菌株要高,其中Nr1510-1菌株的几丁质酶活最高为8.0841±0.1246 U。将复筛得到的高产几丁质酶突变株通过固体发酵方法测定其固体孢子产量得到:Nr1510-1、Nr1510-2菌株的孢子产量较出发菌株的有明显的提高。综合几丁质酶活提高以及固体产孢量的提高,选定Nr1510-1和Nr1510-2菌株为目标高毒力菌株。并将其进行生物测定后比较发现,两株菌株的半数致死时间分别为3.847 d和3.981 d,比出发菌株提高了7.89%和6.86%。