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利用卵母细胞体外成熟技术,可获得大量的廉价卵母细胞,既克服了超数排卵技术的局限性,又满足了胚胎工程技术发展的需要。本文以TCM199为基础培养基探讨了HMG、EGF、TGF-α在牛卵母细胞体外成熟(IVM)和发育中的作用;以确立牛卵母细胞IVM较好的培养体系,为体细胞核移植技术提供大量优质的卵母细胞。在此基础上进一步研究了供体细胞不同的处理方法对核移植重构胚的影响。结果表明:(1)在牛卵母细胞IVM中添加0.2 IU/mL的HMG组卵母细胞的成熟率和激活后的卵裂率显著高于添加0.075 IU/mL、0.15 IU/mL、0.2 IU/mL、0.3 IU/mL HMG组;添加50 ng/mL EGF组成熟率和卵裂率高于对照组和添加30 ng/mL、40 ng/mL、60ng/mL组;添加15 ng/mL TGF-α组成熟率高于对照组和添加5 ng/mL、40 ng/mL组,激活后卵裂率添加15 ng/mL组显著高于其他组。本试验中添加0.2 IU/mL HMG、50 ng/mL EGF、15 ng/mL TGF-α在各实验组中效果最佳。同时试验显示EGF和TGF-α对牛卵母细胞的IVM和激活后的卵裂没有明显的协同作用。(2)分别用冷冻保存的和新鲜的成纤维细胞作为核供体,所得重构胚卵裂率、囊胚率无显著差异;供体细胞离心800 r/min时所得重构胚效果较好,离心1500 r/min所得重构胚的卵裂率、囊胚率与其他三组相比较低;血清饥饿3～5d组所得重构胚比其他三组好;用解冻复苏后再传2代、5代的细胞进行核移植,所得重构胚的卵裂率、囊胚率无明显差异,显著高于传8代的细胞所细胞所得重构胚。