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目的: 在前期研究基础上,对对氯苯丙胺酸(PCPA)致失眠模型大鼠进行灸法干预,观察失眠大鼠行为学变化,运用Elisa、液相色谱串联质谱法,观察大鼠脑干组织中HPA轴相关调节因子的表达。从而探寻蒙医灸疗法治疗失眠症的组穴配伍规律。 方法: 实验选用清洁级雄性SD大鼠70只。随机分成7个组,分别为正常组、模型组、安定组、顶会穴与赫依穴组、顶会穴与黑白际穴组、赫依穴与黑白际穴组、三穴组等7组,每组10只。正常组常规喂养。其余6组腹腔注射PCPA混悬液(1ml/100g),连续注射2天。造模成功后模型组每天抓取固定一次,不做其它处理。安定组每日灌胃地西泮注射液(0.92mg/kg)一次,连续7天。治疗组每日施灸一次,每次5min,连续7天。通过被动回避实验和负重游泳实验观察大鼠记忆变化和抗疲劳程度;运用Elisa法检测大鼠脑干组织中1L-1β、1L-6、TNF-α含量;液相色谱串联质谱法检测5-HT、DA、NE含量。 结果: 1.行为学: (1)被动回避实验:灸疗前模型组在避暗室内的潜伏期缩短,电击次数增多,与正常组比较(P<0.01),说明造模成功后大鼠记忆力有所下降。各治疗组在避暗室内的潜伏期和电击次数与模型组比较无统计学意义。 灸疗结束后模型组在避暗室内的潜伏期缩短,电击次数增多,与正常组比较(P<0.01),各治疗组在避暗室内的潜伏期延长,电击次数减少,与模型组比较(P<0.01) (2)负重游泳实验:灸疗前模型组负重游泳时间明显少于正常组(P<0.01),说明造模后大鼠抗疲劳度降低。各治疗组与模型组比较无统计学意义。 灸疗结束后模型组负重游泳时间明显少于正常组(P<0.01),各治疗组与模型组比较无统计学意义,但赫依顶会穴组、赫依黑白际穴组与三穴组均有延长趋势。 2.1L-1β、1L-6、TNF-α含量:治疗结束后模型组的1L-1β与TNF-α含量均增高,与正常组比较有统计学意义(P<0.05),各治疗组1L-1β与TNF-α含量均降低,与模型组比较有统计学意义(P<0.05);治疗结束后模型组的1L-6含量增高,与正常组比较有统计学意义(P<0.05),各治疗组中赫依黑白际穴组、黑白际顶会穴组与三穴组1L-6含量降低,有统计学意义(P<0.05),;赫依顶会穴组1L-6含量有降低趋势,但没有统计学意义。 3.5-HT、DA、NE含量:治疗结束后模型组5-HT含量降低,与正常组比较有统计学意义(P<0.05),各治疗组5-HT含量升高,与模型组比较有统计学意义(P<0.05);治疗结束后模型组DA含量升高,与正常组比较有统计学意义(P<0.05),赫依顶会穴组与赫依黑白际穴组DA含量均降低,与模型组比较有统计学意义(P<0.05),黑白际顶会穴组对DA无影响;治疗结束后模型组NE含量升高,与正常组比较有统计学意义(P<0.05),各治疗组NE含量降低,与模型组比较有统计学意义(P<0.05)。 结论: 1.PCPA致失眠模型适用于蒙医灸疗法治疗失眠症的筛选和配伍规律实验研究领域。 2.具有治疗失眠作用的顶会穴、赫依穴、黑白际穴在不同组穴配伍情况下有疗效差别。 3.施灸赫依三穴治疗失眠症组穴配伍可能互相干扰,有配伍禁忌。 4.该研究为蒙医灸疗法治疗失眠组穴配伍规律提供了科学依据。