【摘 要】
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本课题分别采取直接酶解和纳豆芽孢杆菌发酵两种方式对豆粕蛋白进行酶解,制备具有ACE抑制活性的短肽产品,旨在提高豆粕蛋白的利用价值。实验优化了两种不同方法制备活性肽的最
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本课题分别采取直接酶解和纳豆芽孢杆菌发酵两种方式对豆粕蛋白进行酶解,制备具有ACE抑制活性的短肽产品,旨在提高豆粕蛋白的利用价值。实验优化了两种不同方法制备活性肽的最佳工艺条件,并对其进行比较,由此得到最优方法,并进行100L放大实验,初步建立了利用豆粕蛋白制备ACE抑制肽的工艺流程,得到的主要结论如下:(1)豆粕预处理:经过酸碱浸泡、超声波以及加热处理三种方式的实验,结果表明三种方式均对ACE抑制率的提高和纳豆菌的生长有一定的促进作用,综合考虑多重因素,对酶解底物豆粕进行加热前处理,对发酵底物豆粕进行超声波前处理。(2)单酶水解:碱性蛋白酶水解豆粕产生ACE抑制肽效果最佳,条件为底物浓度5%,酶浓度5000U/g,水解时间2h,胰蛋白酶水解豆粕产生ACE抑制肽的最佳条件为底物浓度5%,酶浓度800U/g,水解时间为2h。且碱性蛋白酶制备ACE抑制肽活性最高,达到48.67%。(3)复合酶解:通过响应面分析法对碱性蛋白酶和胰蛋白酶组合分步水解条件进行优化,确定最佳条件为碱性蛋白酶浓度5100U/g,pH9,水解时间2h;胰蛋白酶浓度850U/g,pH8,水解时间为2h。在该条件下进行试验验证,碱性蛋白酶与胰蛋白酶先后水解豆粕产物的ACE抑制率达到73.31%。(4)豆粕液的纳豆芽孢杆菌发酵:以菌悬液OD值为指标,碳氮源比例为1:5,功率80W的超声波预处理豆粕培养基4.32分钟,发酵培养条件为pH6.16,温度35.5℃时,菌悬液浓度达到最大值1.635。在此条件下摇床转速180rpm培养20h,获得的发酵液ACE抑制活性最高,达到ACE48.71%。(5)100L规模的ACE抑制肽制备:根据小试优化所得条件进行放大实验,酶解结束后采用液相色谱方法测定酶解液的ACE抑制活性,发现与小试相比活性下降比较明显,仅达到53.04%。
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