姜黄素、槲皮素等八种效应物对光肩星天牛幼虫PPO影响的试验研究

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光肩星天牛[Anoplophora glabripennis(Motsoh)]因其幼虫钻蛀木材,是著名的林业蛀干害虫。近年来,我国部分地区的城市园林绿化也深受其害。1998年美国政府宣布将禁止我国带有木质包装和铺垫材料的产品进入美国境内,以防止一种甲虫—光肩星天牛危害美国的森林。其报告指出,光肩星天牛一旦在美国传播开来,将对美国槭糖业、旅游业和生态环境造成约1380亿美元的直接经济损失。2002年的中美蛀干害虫研讨会上强调了关于以光肩星天牛、黄斑星天牛为代表的蛀干害虫是我国林木的重要害虫,对林业生产构成严重威胁,特别是在以杨柳榆为主的“三北”地区,曾造成毁灭性的灾害。蛀干害虫的危害性越来越受到人们的关注。以昆虫多酚氧化酶为靶标的生物杀虫剂方面研究不多,尤其蛀干害虫方面尚未见报道。本试验选取蛇床子素、槲皮素、姜黄素、穿心莲内酯、绿原酸、厚朴酚、补骨脂、咖啡酸八种不同生物活性的植物化学物质作为多酚氧化酶的效应物来尝试蛀干害虫防治技术的研究。本实验选取蛀干害虫光肩星天牛为受试生物实验结果表明,以光肩星天牛幼虫为材料提取多酚氧化酶,经40%饱和硫酸铵处理的沉淀纯化后,总活力回收率为30.08%,酶活力提高4.486倍。在分别对以光肩星天牛幼虫为材料的粗酶液进行活性比较的实验中发现,蛹期幼虫的PPO的活力明显高于其它各龄期。参照甜菜夜蛾等昆虫的多酚氧化酶反应的最适条件:PH=6.5、T=37℃、最佳反应时间为2min,研究了蛇床子素、槲皮素、姜黄素、穿心莲内酯、绿原酸、厚朴酚、补骨脂、咖啡酸八种化合物对该酶活力的影响,结果表明,其中以甲醇为溶剂配制的效应物对光肩星幼虫多酚氧化酶的活性影响试验中,槲皮素抑制力最强,其次酶活性从大到小顺序是蛇床子素、绿原酸、姜黄素、穿心莲内酯、咖啡酸,且都小于溶剂对照。其中以磷酸缓冲液-甲醇为溶剂的效应物对光肩星幼虫多酚氧化酶的活性影响试验中,蛇床子素的抑制力最强,其次酶活性从大到小的顺于是蛇床子素、姜黄素、穿心莲内酯、绿原酸、咖啡酸、槲皮素,且都小于溶剂对照。根据文献资料和时间的情况,最后选取槲皮素和姜黄素对该酶活力的抑制机理分析,设定两组,其一在底物浓度固定不变的情况下,测得不同酶液量0.02、0.05、0.1、0.15、0.20随不同效应物浓度0.1、0.3、0.5、0.7、0.95μg/mL的酶活力变化,其二在酶液量固定不变的情况下,测得不同底物浓度0.001、0.005、0.01、0.05、0.1mol/L随不同效应物浓度0.1、0.3、0.5、0.7、0.95μg/mL的酶活力变化。用Lineweaver-Burk(双倒数作图法)作图,槲皮素和姜黄素的抑制动力学结果表明,该两种化合物对该酶的影响均是Vmax值的变化对Km值几乎没有任何影响,因此断定槲皮素和姜黄素都是光肩星天牛幼虫多酚氧化酶的非竞争性抑制剂,抑制常数分别为1.8860μg/mL和1.4549μg/mL。槲皮素和姜黄素作抑制剂很早就有人研究,在昆虫领域的研究报道不多,槲皮素和姜黄素二效应物对光肩星天牛幼虫多酚氧化酶的
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