茶多酚—蛋白纳米复合物的研究

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没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)作为一种多酚类化合物,是茶多酚中含量最高、并且发挥主要效能的一类儿茶素,具有抗氧化、抗癌、抗突变等活性。但由于其自身性质不稳定,在潮湿、阳光、高温等条件下极易发生氧化、聚合等反应;另外,由于儿茶素存在苦涩味,亦影响其进一步的工业应用。运用分子自组装技术使其与大分子蛋白结合形成纳米级复合物,有助于提高其理化稳定性。酪蛋白是牛奶中特有的一组线性蛋白,且富含脯氨酸,因此与多酚类物质有很强的亲和力,对茶多酚起到一定的稳定和控释效果。通过美拉德反应接枝多糖可以进一步改善酪蛋白的溶解性、乳化性等,进而提高大分子蛋白对茶多酚的包埋效果,极大的拓展了茶多酚在食品中的应用。本课题以EGCG为模型营养素,以包封率、平均粒径、保留率等为指标,对比了酪蛋白及酪蛋白-葡聚糖美拉德反应后的接枝共聚物对EGCG的包埋效果、贮藏稳定性及在模拟胃肠液中控制释放特性的影响。在此基础上从分子水平上进一步探讨了蛋白分子与EGCG相互作用机理,确定影响载体稳定性的关键因素。此外,本文研究了EGCG-蛋白纳米复合物对乳化体系中亚油酸的保护作用。采用高效液相色谱、动态光散射等手段,以包封率、平均粒径及贮藏稳定性为指标,考察并对比酪蛋白及糖基化酪蛋白与EGCG形成复合物的最佳工艺条件。结果表明,当酪蛋白浓度为2.5mg/mL,蛋白溶液pH7.0,EGCG/酪蛋白摩尔比10:1时,制得的EGCG-酪蛋白复合物包封率达86%,平均粒径为88nm。该复合物在贮藏十天期间粒径变化较为明显,EGCG保留率下降至65%左右。酪蛋白的糖基化有助于提高酪蛋白对EGCG的包埋和稳定能力。当糖基化酪蛋白浓度为2.5mg/mL,蛋白溶液pH6.5~7.5,EGCG/糖基化酪蛋白摩尔比64:1时,制得的EGCG-糖基化酪蛋白复合物对EGCG的包封率达93%,平均粒径为72nm,且贮藏十天期间粒径变化缓慢、保留率维持在70%以上。采用体外模拟消化实验分析蛋白对EGCG的控制释放效果,研究发现糖基化酪蛋白的包埋可以实现对EGCG的缓慢持续释放,同时显著抑制EGCG降解速率。通过荧光光谱、圆二色谱、傅里叶红外光谱等手段,表征EGCG对蛋白分子构象的影响,通过EGCG对蛋白内源荧光的猝灭作用探讨其与蛋白之间的相互作用类型、结合常数及结合力。荧光光谱法显示,EGCG与蛋白的猝灭类型为静态猝灭,两者的相互作用驱动力主要为氢键作用,且结合强度受温度影响较大。圆二色谱及红外光谱显示,EGCG主要与蛋白的氨基酸发生相互作用,对蛋白的二级结构影响不大。小角X射线散射及透射电镜显示,糖基化酪蛋白在溶液中可形成以蛋白为内核、以接枝糖链为外壳的核壳结构,从而增强了酪蛋白的亲水性,提高与EGCG的接触面积。EGCG-蛋白纳米复合物对乳化体系中的亚油酸有较好的保护作用,并且糖基化酪蛋白自身兼具乳化稳定性好的抗氧化性,与EGCG可协同发挥界面抗氧化作用,为提高亚油酸的贮藏稳定性提供了新的可能。
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