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目的:成功创建豚鼠创伤性鼓膜穿孔模型。观察血竭蜈蚣油及其不同组成成分对模型动物鼓膜生长情况的影响,检测其对豚鼠鼓膜碱性成纤维细胞生长因子(basic Fibroblast Growth Factor,bFGF)及转化生长因子β1(transforming growth factor beta1,TGFβ1)组织含量及其基因表达的影响。 方法:将72只豚鼠随机分为空白组、模型组、血竭蜈蚣油组、血竭油组、蜈蚣油组、甘油组六个组,除空白组豚鼠外其余各组豚鼠乙醚麻醉后,酒精消毒双侧外耳道,用耳镜撑开豚鼠外耳道,在耳纤维内镜下查清鼓膜结构,用针持夹持5ml无菌灼热针尖划开豚鼠鼓膜紧张部,制作穿孔面积约为鼓膜总面积1/2的创伤性鼓膜穿孔模型。造模后的豚鼠按照5万U/100g大腿肌肉注射青霉素钠,连续5天。手术次日将造模成功的豚鼠乙醚麻醉满意后消毒及清理外耳道血痂,除模型组外各组豚鼠给予浸有相应油剂的贴膜进行鼓膜贴补治疗。贴补治疗后每日用自制滴耳器给于相应的油剂滴耳,保持外耳道及贴膜湿润。贴膜每4天更换一次。于造模后的第3、5、7、10、14天,各组分别随机选取2只豚鼠处死,取出完整的鼓膜标本,通过酶联免疫吸附试验(Enzyme-Linked Immunosorbent Assays,ELISA)和实时荧光定量(Real-Time PCR)测定标本中的bFGF、TGFβ1含量和基因表达水平。第14天处死剩余2只,取出听泡,暴露鼓膜后置于4%多聚甲醛中固定,脱水、包埋、切片后做HE染色,观察各组鼓膜组织生长情况。对测得的ELISA和PCR数据用SPSS20.0进行双因素的方差分析。 结果:1.成功创建豚鼠创伤性鼓膜穿孔模型。2.HE染色结果观察发现血竭蜈蚣油组鼓膜生长情况最好,纤维组织层生长满意,其余各组与生长较模型组稍有差异,模型组新生鼓膜较菲薄,纤维组织层生长不全。3.统计学结果表明空白组bFGF、TGFβ1的组织含量与各组之间存在差异(P<0.05),血竭蜈蚣油组与模型组之间存在差异(P<0.05),而血竭甘油组、蜈蚣甘油组及甘油组与模型组之间无明显差异(P>0.05)。鼓膜组织bFGF、TGFβ1mRNA表达上调的倍数经统计学分析表明血竭蜈蚣油组与模型组之间存在差异(P<0.05),而血竭油组、蜈蚣油组及甘油组与模型组之间无明显差异(P>0.05)。分析结果表明,不同天数bFGF、TGFβ1在鼓膜组织中的含量及基因表达上调的倍数是不同的(P<0.05)。 结论:1.通过灼热针尖划开鼓膜可成功制造创伤性鼓膜穿孔模型。2.血竭蜈蚣油可以促进豚鼠创伤性鼓膜穿孔的愈合,可以促进创伤鼓膜的中间纤维层组织层的生长,使得纤维组织秩序排列,而且只有当血竭与蜈蚣两药合用时效果更为明显。3.血竭蜈蚣油可上调豚鼠创伤性鼓膜模型鼓膜bFGF、TGFβ1mRNA基因的表达强度,提高鼓膜组织bFGF、TGFβ1的浓度,龙血竭和蜈蚣同时应用时更有作用意义。而且根据数据可发现在创伤性鼓膜穿孔发生后的第5天到第7天效果最明显。虽然血竭或者蜈蚣单味用药时对bFGF、TGFβ1的影响无统计学意义,但从统计学图表可以看出,单味用药时也可以提高其基因表达,使得其组织含量提前达到峰值,含量相对增加。