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睾丸支持细胞(Sertoli cell, SC)为生精细胞的分化成熟提供激素、脂类、维生素等多种营养物质；与生精细胞共同构成睾丸曲细精管的主要组织结构。SC与生精细胞数量比例保持恒定是生精细胞分化的一个重要条件,SC的数量决定了成年动物睾丸产生精子的数量。SC的增殖受多种因素的调节,在所有影响的激素和因子中,Skp2是调节细胞增殖的关键性因子,Skp2能与发生泛素化的p27kip1结合,促使p27kip1在26S的蛋白酶体上发生降解,促进细胞增殖。大量的研究表明,雌激素在睾丸支持细胞增殖中发挥了重要作用,而PI3K/Akt参与了细胞增殖的调节,研究PI3K/Akt在雌激素调节睾丸支持细胞增殖中的作用机制有利于阐明支持细胞增殖的机制。本研究的目的是,确定雌激素是否通过PI3K/Akt信号通路调节体外培养条件下未成熟仔猪睾丸支持细胞中Skp2蛋白和mRNA以及CyclinEl mRNA, CyclinD1mRNA的表达。本研究以培养的仔猪睾丸支持细胞为实验材料,通过添加雌激素受体抑制剂以及多种信号通路的抑制剂,应用流式细胞仪检测细胞周期数量的变化,western blot检测Skp2、p27kip1、PCNA蛋白含量,并用实时荧光定量PCR检测Skp2mRNA、CyclinE1mRNA、CyclinD1mRNA的相对表达量。实验结果发现：(1)浓度为10-9mol/L的17β-雌二醇是促进SC细胞由G1期向S期转换的最佳浓度(2)17β-雌二醇(10-9mol/L)以时间依赖的方式促进了PI3K、Akt活性(P<0.05),这一作用在30mmin时到达到高峰。(3)GPR30受体抑制剂G-15抑制了17β-雌二醇诱导的PI3K的表达(P<0.05),受体激动剂G-1促进了PI3K的表达(P<0.05)。(4)SRC抑制剂PP2抑制了17β-雌二醇诱导的PI3K的表达(P<0.05)。(5)PI3K抑制剂LY294002抑制了17β-雌二醇诱导的Akt的表达(P<0.05)。(6)17β-雌二醇(10gmol/L)促进了Skp2蛋白、PCNA蛋白、CyclinD1mRNA和CyclinE1mRNA的表达(P<0.05),但是却能降低p27Kip1蛋白的表达量。而LY294002和Akt抑制剂10-DEBC都抑制了17β-雌二醇(10-9mol/L)的活性(P<0.05),但两种抑制剂单独作用时对Skp2蛋白、CyclinD1mRNA和CyclinEl mRNA的表达与空白相比没有显著影响(P>0.05)。(7)LY29002和10-DEBC能够降低由17β-雌二醇诱导的SC细胞G1期向S期转换。综上所述,17β-雌二醇通过GPR30、SRC影响PI3K/Akt激活,调节Skp2的蛋白和mRNA以及CyclinD1mRNA、CyclinE1mRNA的水平,促进SC细胞由G1期向S期转换,进而调控SC的增殖。