基于RNAi技术及功能分类基因芯片探讨survivin基因对人肺癌细胞侵袭的作用及机制

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背景:肺癌是我国发病率最快的恶性肿瘤之一,癌细胞侵袭转移与患者不良预后密切相关。从分子水平深入探讨肺癌细胞侵袭转移相关机制,将可能有助于肺癌综合治疗。   目的:了解Survivin基因在不同肺癌细胞中mRNA表达水平;survivin基因siRNA,转染肺癌细胞株,观察对肺癌侵袭和迁移的影响;借助于功能分类(转移)基因芯片,从基因水平探讨survivin基因调控肺癌细胞侵袭和迁移的分子机制。   方法:应用荧光实时定量RT-PCR方法筛选survivin基因在不同肺癌细胞系中的mRNA水平水平;选择survivin表达最高细胞株,通过脂质体转染法,将survivin基因siRNA转染肺癌细胞后,分别采用荧光实时定量RT-PCR和WesternBlot检测survivin基因mRNA和蛋白水平。采用软琼脂集落培养试验检测锚着不依赖性增殖性,采用Transwell方法检测癌细胞的侵袭能力。其次,收集转染48h的癌细胞,采用包含有88个转移相关基因芯片检测基因表达情况。结果:survivin基因在肺癌A549细胞株中mRNA水平最高。以survivin基因siRNA转染A549细胞后,转染组癌细胞survivinmRNA和蛋白水平明显被抑制,且与时间和浓度相关(P<0.005,P<0.005)。与对照组比较,转染组细胞穿膜细胞数明显减少,且呈浓度依赖性(P>0.05)。与对照组比较,软琼脂集落形成数明显减少(P<0.005)。基因芯片检测发现,88个基因中,有35个基因表达出现明显变化,其中27个基因明显下调,包括MMP-2、MMP-7和VEGF,有8个基因出现明显上调。结论survivin基因siRNA转染可明显抑制肺癌细胞的恶性侵袭能力。借助于功能分类基因芯片,科从转移相关基因角度初步明确survivin调控肺癌细胞侵袭的分子机制。
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