柴胡皂苷d对顺铂导致大鼠胃粘膜炎性损伤的保护作用机制研究

来源 :辽宁中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:shen41941395
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目的:研究柴胡皂苷d是否通过调节IL-6、IL-1β、PGE2相关炎症因子,减轻顺铂导致大鼠胃粘膜炎性损伤;初步探讨柴胡皂苷d是否通过影响PI3k/AKT信号通路,调控BCL-2蛋白,起到保护胃粘膜的作用。材料与方法:选用160-180g SD大鼠30只,由辽宁省实验动物资源中心(辽宁长生生物技术有限公司)提供,随机分为三组,空白组、顺铂组、柴胡皂苷d+顺铂组(中药组),每组各10只大鼠,分笼饲养,3组实验同时进行。本实验根据文献[1]给药剂量方法分别为顺铂6 mg/kg尾静脉注射给药,柴胡皂苷d 6.5 mg/kg灌胃给药(本实验根据文献[2,3]选择3.5mg/kg,5mg/kg,6.5mg/kg药物浓度进行比较,确定6.5mg/kg为最优药物浓度选择)。空白组生理盐水灌胃,顺铂组1-4天顺铂注射,5-10天生理盐水灌胃,中药组1-3天柴胡皂苷d灌胃,4-7天给予顺铂+柴胡皂苷d,8-10天继续给予柴胡皂苷d,共给药10天,禁食水24h后处死,留胃部标本。按照上述分组每天一次灌胃(ig),定时并且连续给予ig,实验间期大鼠自由饮食水。每天分别称取给药前后大鼠体重并记录,计算每只大鼠给药前后的体重增减值,观察大鼠的胃粘膜损伤情况,计算大鼠胃粘膜损伤指数,利用HE染色、免疫组化(IHC)、ELISA、Western-Blot检测胃粘膜损伤中相关炎症因子及其蛋白的表达情况,初步探讨柴胡皂苷d保护胃粘膜的可能作用机制。统计分析:采用SPSS19.0软件进行统计处理,计数资料分析采用卡方检验;计量资料以均数±标准差表示,采用t检验;P<0.05为差异具有统计学意义。结果:1.大鼠自身情况:空白组大鼠精神正常,活动正常,无其他症状;顺铂组大鼠精神萎靡,活动减少,毛发无光泽稀疏脱落,大便溏稀,易激惹,暴躁等症状;中药组大鼠精神可,活动未见明显减少,被毛未见稀疏脱落且有光泽,大便溏稀明显减少。2.体重:空白组体重增加;顺铂组体重明显减轻;中药组体重减轻有所改善。3.胃粘膜损伤指数(UI):解剖后肉眼观察空白组胃部未见胀气及膨大等,胃组织粘膜表面呈现淡红色,粘膜表面光滑、完整,无充血水肿及破损,无出血点;顺铂组可见胃部膨大,有大量食物残留,有明显胀气现象,胃粘膜损伤情况稍重,粘膜颜色鲜红,局部病变,红肿,粘膜表面呈现少量出血点但较少,肉眼观察损伤程度并不十分严重,损伤指数评分高于空白组;中药组胃部无食物残留,未见明显胀气,较同一时期顺铂组大鼠胃组织病变减轻,可见粘膜损伤较轻,粘膜呈现淡粉色,完整无破损,无明显点状出血,损伤指数评分低于顺铂组。4.HE:空白组可见胃粘膜腺体结构完整,细胞排列整齐,毛细血管丰富,各层之间连续清楚,未见炎细胞浸润;顺铂组胃粘膜腺体结构破坏,大部分脱落,细胞排列无序,血管破裂且可见大量红细胞浸润,粘膜下可见炎细胞浸润;中药组胃粘膜腺体不存在或存在较少脱落,大体腺体排列整齐,未见红细胞浸润,细胞内充血有所改善,炎症细胞浸润明显减少,统计学均具有明显差异(P<0.05)。5.免疫组化(IHC):与空白组比较,顺铂组及中药组PI3k、AKT蛋白含量均明显升高,且中药组高于顺铂组,顺铂组及中药组Bcl-2蛋白均含量降低,但中药组高于顺铂组,差异有统计学意义(P<0.05)。6.Western-Blot:与空白组比较,顺铂组及中药组p-PI3k、p-AKT蛋白含量均明显升高,且中药组高于顺铂组,顺铂组及中药组Bcl-2蛋白含量均低于空白组,但中药组高于顺铂组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。7.ELISA:顺铂组炎症因子IL-6、IL-Iβ表达高于空白组及中药组,PGE2水平低于空白组及中药组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:1.传统中药柴胡提取物之柴胡皂苷d可提高胃粘膜损伤后的PGE2水平,降低IL-6、IL-Iβ的表达,减轻胃粘膜炎性损伤;2.柴胡皂苷d可能通过影响PI3K/AKT信号通路,上调Bcl-2蛋白的表达,减轻损伤,保护胃粘膜。
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