动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）是冠心病和中风等心脑血管疾病的主要病理基础。动脉粥样硬化斑块的发展最终导致局部血液循环受阻,从而导致急性心肌梗死及脑梗塞等心脑血管疾病的发生。我国每年大约有300万患者死于此类病因。巨噬细胞在动脉粥样硬化的发展中起到至关重要的作用,炎症反应则与巨噬细胞浸润、泡沫化和凋亡的全过程密切相关。因此,研究巨噬细胞炎症反应的调控机制对于理解动脉粥样硬化发生的机制和发展新的治疗策略具有重要意义。我们在前期研究中发现白细胞免疫球蛋白家族成员LILRB4在斑块内的巨噬细胞中随动脉粥样硬化发展表达明显升高,而早期研究结果表明LILRB4具有抑制炎症反应的功能。因此,我们推测LILRB4可能通过抑制巨噬细胞炎症反应调控动脉粥样硬化的发生。本文研究了 LILRB4在动脉粥样硬化发生中的功能,并初步阐释了其调控动脉粥样硬化的机制。首先,我们验证了 LILRB4蛋白在巨噬细胞中上调与动脉粥样硬化密切相关。我们证实了 LILRB4在冠心病患者冠状动脉斑块中表达明显升高。LILRB4表达上调也在高脂饮食诱发ApoE基因敲除小鼠形成的主动脉根斑块中得到验证。免疫荧光染色显示升高表达的LILRB4主要定位于巨噬细胞。其次,我们证明了 LILRB4具有抑制动脉粥样硬化中斑块形成的功能。我们将LILRB4缺失小鼠与Apoe-//小鼠杂交获得双基因敲除Lilrb4-/-Apoe-/-小鼠,利用高脂喂养小鼠建立动脉粥样硬化疾病模型。实验结果揭示LILRB4的缺失导致斑块面积增多,同时斑块不稳定性显著增加,即促进了动脉粥样硬化的发展。骨髓移植实验显示,移植了Lilrb4-/-Apoe-/小鼠骨髓细胞的Apoe-//小鼠动脉粥样硬化状况显著比对照小鼠恶化。结合LILRB4在巨噬细胞中显著上调的结果,表明LILRB4可能通过调控巨噬细胞的功能而在动脉粥样硬化中起抑制作用。再者,我们揭示了 LILRB4通过招募SHP1抑制NF-κB的信号通路调控网络。我们发现LILRB4敲除使斑块处NF-κB信号通路增强。与之对应,血清中的促炎症因子也显著增多。进一步研究发现,LILRB4敲除导致下游分子SHP1的磷酸化水平大幅降低,同时LILRB4和SHP1存在相互作用,Ox-LDL刺激能增强这种相互作用。SHP1特异性激动剂“regorafenib”能够抵消因LILRB4缺失而增强的NF-κB活化。我们的结果表明,LILRB4通过招募SHP1起到抑制NF-κB信号通路的作用。这些结果表明LILRB4的缺失促进了动脉粥样硬化斑块炎症反应。最后,我们阐释了 LILRB4-SHP1轴通过影响TRAF6泛素化从而抑制NF-κB信号通路的分子机制。我们发现LILRB4和SHP1均能抑制TRAF6的泛素化修饰,并且SHP1的敲低阻断了 LILRB4对TRAF6的泛素化抑制作用。免疫共沉淀实验发现SHP1能结合TRAF6的Coiled-Coil结构域。同时,LILRB4促进SHP1与TRAF6的结合。将LILRB4蛋白中ITIM基序中的酪氨酸失活突变后,LILRB4既不能招募SHP1也不能促进SHP1与TRAF6的结合。这些结果显示,LILRB4的ITIM基序招募SHP1与TRAF6形成复合物并抑制TRAF6泛素化,从而抑制炎症反应。综上所述,LILRB4作为免疫抑制受体,通过SHP1的招募发挥抑制NF-κB的功能,缺失LILRB4的巨噬细胞显著增强斑块损伤处炎症反应从而导致动脉粥样硬化病变恶化。我们的研究揭示了 LILRB4在动脉粥样硬化发生发展中的功能和机制,为开发动脉粥样硬化靶向治疗提供实验依据和潜在靶点。