芸薹生链格孢转录因子基因Ab06986的克隆与功能研究

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十字花科蔬菜黑斑病是由链格孢引起的世界性真菌病害,从20世纪90年代开始,该种病害在我国北方发生严重,至今仍对十字花科蔬菜的生产存在较大威胁。芸薹生链格孢(Alternaria brassicicola)为该病害主要病原之一。转录因子是参与病原菌生长发育及致病性的重要调控因子,因此研究芸薹生链格孢的致病相关转录因子,有助于认识其致病分子作用机制,对于防治芸薹生链格孢引起的黑斑病至关重要。锌指蛋白中的Zn2Cys6是真菌中特有的一类转录因子,调控真菌的多种生理过程,包括真菌的生长、产孢和侵染寄主的过程。该类转录因子在芸薹生链格孢菌种中尚未被系统的研究。  本研究主要以芸薹生链格孢(A.brassicicola)的一个Zn2Cys6转录因子基因Ab06986为研究对象,克隆了Ab06986基因,对Ab06986基因缺失突变体的生物学性状进行了研究,系统探索了Ab06986基因的生物功能。本研究共获得了三株Ab06986基因缺失突变体,与野生菌、互补体的性状功能对比结果如下:  (1)Ab06986基因参与调控芸薹生链格孢的菌落形态和气生菌丝生长:在MM培养基上,3株突变体菌落中央呈浅黄色,菌落边缘呈米白色,菌丝多为埋生菌丝,无分生孢子层,野生菌中央深绿,四周灰绿色,气生菌丝很少,表层有分生孢子层;在PDA培养基,3株突变体呈现灰白色,菌丝生长以气生菌丝为主,表面无分生孢子层,野生菌呈现深绿色,以埋生菌丝生长为主,菌落表层覆盖厚厚的分生孢子层;  (2)Ab06986基因参与调控芸薹生链格孢生长速度:在MM培养基上,ΔAb06986菌落生长速度与野生型相比明显减小;但在PDA培养基上,二者无明显差异;  (3)Ab06986基因参与调控芸薹生链格孢孢子产生:3个突变体菌丝与野生菌相比未见明显差异,但丧失了产孢能力;  (4)Ab06986 基因负调控芸薹生链格孢的抗氧化能力:在含有H2O2的培养基上, 3个突变体生长速度均高于野生菌;  (5)Ab06986 基因参与调控芸薹生链格孢的体外穿透力:各菌株均可在玻璃纸上生长,揭去玻璃纸继续培养,突变体菌落直径明显小于野生菌和互补体,说明其穿透能力与野生菌相比较弱;  (6)Ab06986 基因参与调控芸薹生链格孢的致病力:完整叶片和创伤叶片接种显示3个突变体致病力均明显低于野生菌。
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