全蝎的最佳酶解和灭活工艺及抗肿瘤作用的研究

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目的:本实验研究了全蝎酶解的最佳酶解工艺、全蝎粉的最佳灭活工艺、用MTT法进行细胞实验和观察荷瘤小鼠对全蝎粉的反应的方法来研究全蝎的抗肿瘤作用,使这一动物性中药材得到更好的开发利用。方法:用考马斯亮蓝法和福林酚法通过测定蛋白质的含量来衡量酶解效果;采用正交实验来探究最佳酶解工艺;采用MTT法体外抗肿瘤细胞实验,观察全蝎水提物对乳腺癌细胞、食管癌细胞、肺腺癌细胞、正常细胞生长的抑制作用;以荷瘤小鼠脾指数、胸腺指数及其血清中的MDA含量、SOD活性为目标,初步探究全蝎的抗肿瘤作用。结果结论:根据活性寡肽的相对含量计算公式,把发酵前酶解前的寡肽含量定为0,则发酵后酶解前、发酵前酶解后、发酵后酶解后的寡肽含量分别为8.15、4.63和7.36(单位为m/g*100g-1)。表明发酵后酶解前的寡肽含量最高,发酵粉中的活性寡肽类成分含量有显著增加。正交实验表明,仿胃提取中,当酶底比为2.00%、PH值为2.0、酶解时间60min时的蛋白质含量最高,为93.06mg/g;仿肠提取中,当酶底比为5.00%、PH值为8.5、酶解时间360min时的蛋白质含量最高,为50.61mg/g。采用最优酶解工艺酶解的全蝎水提物,在PH值为1.5的环境下,以温度为60℃,灭活30min的灭活工艺最佳。全蝎的酵前酶前、酵后酶前、酵后酶后提取物对食管癌细胞、乳腺癌细胞和肺腺癌细胞具有不同程度的抑制作用。其中酵后酶前提取物抑制肺腺癌细胞生长的作用尤为明显,浓度为100μ g/mL的酵后酶前提取物的肺癌抑制率为24.79%左右。全蝎水提液能抑制小鼠S180肉瘤细胞的生长,其中高剂量组的抑瘤率最强(43.34%)。全蝎水提液还能升高小鼠脾指数及胸腺指数,能明显增加SOD的活性、降低血浆中MDA的含量,提示全蝎提取液抗肿瘤作用与降低体内脂质过氧化反应、清除体内过多有害自由基,以及增强机体免疫力有关。
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