乳腺癌在女性世界中是最经常被诊断出来的恶性肿瘤之一,也是女性致死的第二大癌症。乳腺癌的早期诊断对于及时预防和治疗,以及防止乳腺癌的转移和降低致死率有至关重要。由于缺乏有效的乳腺癌标志物,乳腺癌的早期检测还存在一些不足。荧光标记的具有RNA剪切功能的脱氧核酶(RFD)是一种能够特异性识别并且结合靶标,实现RNA剪切功能的DNA分子。在实验室前期的工作当中,我们利用指数富集的系统配体进化技术(SELEX),成功筛选出一条能够特异性识别三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的RFD分子探针AAI2-5。AAI2-5是世界上首个针对肿瘤检测的RFD分子探针,并且该探针成功地应用于临床组织样本的检测。为了使AAI2-5得到进一步的实际应用,我们对RFD探针AAI2-5的性质进行了深入研究,同时,优化了分子探针的反应条件以及结构,以期望提高探针的灵敏性和实用性。首先,我们对RFD探针AAI2-5的反应条件做了一系列的优化,其中包括反应时间、反应缓冲液的pH、辅酶离子的种类以及辅酶离子的浓度,最终确定出RFD探针AAI2-5的最佳反应条件。其次,我们将AAI2-5的序列做了一系列长度优化并且模拟了探针的二级结构,我们成功地将RFD探针AAI2-5催化区间的序列长度由40个碱基缩短到25碱基,减小了该探针的合成成本,使得该探针在实际应用的过程中更加的经济,为该探针能够广泛应用到实际检测中提供了前提。同时,通过软件模拟,我们优化并确定了两条探针的二级结构,通过对比两条探针的二级结构,我们发现优化后的探针的二级结构在保留主要结构的基础上更加的简单。最后我们针对优化后的探针做了特异性和灵敏度的测试,结果表明,优化后的探针在特异性方面保持了原始探针的特异性;在灵敏度方面,优化后的探针的表现出更好的灵敏度,其检测限由5000个细胞/mL(大约0.5μg/mL MDA-MB-231细胞蛋白)降低至2000个细胞/mL(大约0.2μg/mL MDA-MB-231细胞蛋白)。优化后的新探针,具有更短的序列,更低的检测限和良好的特异性,这为RFD探针实际应用到临床检测中提供了有力的支撑。同时在本研究中,我们建立了一个优化体系,为以后针对于其它靶标的DNAzyme的优化提供参考。