论文部分内容阅读
余甘子（Phyllanthus emblica Linn.）在中国的资源很是丰富,发展前景也很广阔。但由于其性凉,味甘、酸、涩,难以直接被人们食用。因此,人们忽略了对余甘子这一天然资源开发利用,现有研究中大多也都是针对工艺的,而少数关于生理活性成分、保健功能及开发利用的研究也都仅处于起步阶段,仍需要进一步的探究。经研究发现,余甘子富含超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,简称SOD）,SOD能够催化生物体内超氧自由基（O2-）发生歧化,是机体内O2-的天然消除剂,被誉为“人体垃圾清道夫”。本研究以余甘子为原料,对SOD的分离及纯化技术进行了研究,并利用提取、纯化后的SOD进行体内和体外的活性研究。主要结果如下:（1）以超氧化物歧化酶的得率为考察值,采用Plackett-Burman试验设计从微波功率、微波时间、料液比、超声功率、超声时间和热变温度筛选主要因素,其主要影响因素为热变温度、超声时间和超声功率,采用Box-Benhnken中心组合试验设计优化余甘子中超氧化物歧化酶的提取工艺参数,当超声时间为12min,超声功率为350W,热变温度为52.5℃时,最大得率为107.15mg/100g。（2）本试验采用硫酸铵分级、透析,超滤和SephadexG-100层析分离纯化余甘子超氧化物歧化酶。该试验分析了20%-90%的硫酸铵饱和度下沉淀的超氧化物歧化酶的活性,饱和度为50%和80%时,余甘子中超氧化物歧化酶的活性变化较大,因此,选取饱和度50%和80%作为分级沉淀的参数,作为进行下一步试验的理论依据。然后,将饱和度50%和80%的硫酸铵进行分级沉淀,得到1.77倍的纯化倍数,回收率为69%。当硫酸铵饱和度为90%时,超氧化物歧化酶中的蛋白不会完全沉淀出来,可以看出,硫酸铵沉淀法不能完全纯化超氧化物歧化酶,需要进行进一步的纯化。透析,超滤可进一步的分离纯化超氧化物歧化酶,通过8h的透析及15min的超滤,得纯化倍数7.93倍,回收率59%。由于大孔树脂具有吸附性强、价格低廉等优点,因此本试验通过对SephadexG-100层析对超氧化物歧化酶进行纯化,得纯化倍数64.64,回收率达37%。（3）通过紫外吸收光谱推断,余甘子中主要含有Fe-SOD和Mn-SOD。通过电泳分析出硫酸铵分级沉淀、透析,超滤和SephadexG-100层析联用法对余甘子中超氧化物歧化酶分离纯化效果较好,纯化后,条带主要集中在40KD左右,因此,推测余甘子中主要含有Fe-SOD。根据原子吸收光谱可知,余甘子中超氧化物歧化酶铁含量为8.95mg/kg,锰含量为0.31mg/kg,可以看出,余甘子中主要含有Fe-SOD和少量的Mn-SOD。（4）通过对不同量的黄酮对超氧化物歧化酶的酶活性影响的研究,得黄酮所占质量比越大,余甘子中超氧化物歧化酶的剩余活力越高,由此可见,黄酮含量对超氧化物歧化酶的剩余活力起到了一定作用。通过温度对超氧化物歧化酶及超氧化物歧化酶和黄酮混合物活性影响的研究,得在温度为0℃-60℃,加入黄酮的超氧化物岐化酶对其酶活性没有明显影响,在60℃以上,黄酮对超氧化物歧化酶的活性具有一定影响。在高温条件下,探究黄酮对超氧化歧化酶的酶活性的影响,得黄酮在高温条件下,黄酮对超氧化物歧化酶的活性有一定损害。通过pH对超氧化物歧化酶及超氧化物歧化酶和黄酮混合物的活性影响的研究发现:在酸性条件下,通过黄酮对超氧化歧化酶的酶活性的影响的研究,得在pH5.0-12.0的范围内无明显变化,在强酸条件下,黄酮对超氧化物歧化酶的活性有保护作用。在模拟消化过程中,黄酮对超氧化歧化酶的酶活性的影响的研究,得黄酮在人工胃液、人工肠液和人工胃肠液条件下,黄酮对余甘子中超氧化物歧化酶的酶活性有一定的保护作用。通过以上一系列的实验,对今后研究黄酮对余甘子中超氧化物歧化酶的活性的影响奠定了理论基础,为工业生产相关产品提供一定的数据支持。（5）本试验通过不同光质对超氧化物歧化酶的酶活力影响,得绿光、蓝光和红光对余甘子中超氧化物歧化酶的酶活性有促进作用,黄光和紫光对余甘子中超氧化物歧化酶的酶活性有抑制作用。通过对不同光照温度、光照时间和光照强度的研究。筛选出光照温度为30℃、35℃和40℃,光照时间为30min、60min和90min,光照强度为1500lux、2000lux和2500lux建立Box-Benhnken模型,利用Design Expert8.0对回归方程进行分析可知,最佳光照条件为:光照时间为63min,光照强度为2150lux,光照温度为31℃,余甘子中超氧化物歧化酶的剩余活力为90.37%。