【摘 要】
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为了得到高抗逆性、高生物活性的益生菌菌株,研究其生理特性,以期进一步地在生产上应用,本研究从健康猪的新鲜粪便及肠道内容物、传统食物等来源分离筛选目标益生菌,分离得到
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为了得到高抗逆性、高生物活性的益生菌菌株,研究其生理特性,以期进一步地在生产上应用,本研究从健康猪的新鲜粪便及肠道内容物、传统食物等来源分离筛选目标益生菌,分离得到两株抗逆性强、具有潜在益生性能的菌株ZZS16-3和菌株LYP06-2,两者都具有较强的抗逆性,在人工胃液、人工肠液、不同浓度的胆盐环境中存活,并保持较高的存活率。细菌的菌落形态观察、染色镜检、生化试验以及16S rDNA序列分析及同源性比较,综合确定菌株ZZS16-3为枯草芽孢杆菌,菌株LYP06-2为植物乳杆菌。枯草芽孢杆菌ZZS16-3能够产生多种酶类,如蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、纤维素酶和木聚糖酶等,并且能够抑制金黄色葡萄球菌,菌株LYP06-2具有产酸的特性,能够抑制大肠杆菌,具有潜在的益生性能。从毒理学角度评价枯草芽孢杆菌ZZS16-3和植物乳杆菌LYP06-2这两种菌的安全性,进行急性毒性试验,发现试验昆明小鼠未出现中毒症状,无小鼠死亡,剖检未见异常,两者的急性毒性试验最大耐受剂量MTD>15000 mg/Kg,按照GB15193.3-2003中急性毒性(LD50)剂量分级表,属于无毒级别。30天大鼠实验结果表明,与对照组比较,复合菌液对大鼠生长发育、代谢无不良影响,脏器指数、血常规、血液生化及病理学检查均未见异常。通过单因素分析,确定最佳碳源为酵母浸粉,最佳氮源为明胶,最佳无机盐为CaCl2,通过正交实验分析得到最佳培养基配方为:0.5%酵母浸粉、1.5%明胶、1.5%CaCl2;通过发酵条件分析确定发酵初始pH为7.2,发酵温度37℃,转速为150 r/min。按照1%的接种量接种到装有6L发酵培养基的发酵罐中,初始pH为7.2,培养温度37℃,转速150 r/min,罐压0.05 Mpa,通风比:1:0.8,培养18 h,得到芽孢生成率90%以上,活菌数为3.1×109 CFU/mL的枯草芽孢杆菌发酵液。饲料中添加含有枯草芽孢杆菌ZZS16-3和植物乳杆菌LYP06-2的复合微生态制剂在一定程度上提高了仔猪的生长性能,减少仔猪腹泻,降低料重比。
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