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研究目的癌症类型中,肺癌是发病率和死亡率最高的肿瘤之一,约有30%~40%的中晚期肺癌病人会发生骨转移,严重危害人类的健康和生活质量。黑色素瘤特异性抗原(Preferentially expressed antigen of melanoma,PRAME)是于众多黑色素瘤病人群体中筛查得出,它是一种表面抗原,细胞毒性T淋巴细胞可以识别PRAME,随即引发特异肿瘤的相关性溶解。目前,国内外研究已确定PRAME可以作为一个判断该肿瘤患者预后及复发情况的重要指标,PRAME在原发性骨肉瘤,皮肤鳞状细胞癌等肿瘤中的表达高低也预示着肿瘤的演出转移情况。为了阐明PRAME在肺癌骨转移及其对下游基因信号通路调控的作用机制,我们设计了本实验研究。研究方法1.检测正常人肺组织、肺癌原位肿瘤及骨转移肿瘤标本中PRAME表达水平获取正常人肺组织、肺癌原位肿瘤及肺癌骨转移肿瘤组织,通过蛋白质免疫印记检测蛋白电泳及实时定量聚合酶链式反应等检测明确PRAME,E-cadherin在表达水平上的差异及意义。2.检测PRAME对肺癌细胞系迁移及侵袭能力的影响体外验证PRAME基因在肺癌骨转移中的影响,建立稳定敲除PRAME的肺癌骨转移亚克隆细胞系PC9及A549,利用MTT,侵袭实验等技术检测细胞迁移和增殖能力及PRAME对E-cadherin蛋白水平和RNA水平的影响。3.小鼠骨肿瘤模型中PRAME表达水平对肺癌骨转移的影响骨内局部注射法利用上述PC9细胞系建立小鼠胫骨肺癌骨转移模型,通过实时定量聚合酶链式反应,蛋白质免疫印记检测,免疫组化等方法检测PRAME基因的表达与E-cadherin蛋白水平的关系,通过X-Ray,荧光标记活体成像等方法对小鼠肿瘤模型进行评估。研究结果1.检测正常人肺组织、肺癌原位肿瘤及骨转移肿瘤标本中PRAME表达水平蛋白质免疫印记检测及实时定量聚合酶链式反应的结果证实正常人肺组织、肺癌原位肿瘤及肺癌骨转移肿瘤组织中PRAME及E-cadherin均有表达,其中正常人肺组织中的表达水平最高,骨转移组织最低。2.检测PRAME对肺癌细胞系迁移及侵袭能力的影响体外实验中,抑制PC9及A549的PRAME基因的表达,细胞迁移及增值活性上均明显低于对照组细胞系,同时E-cadherin蛋白表达水平与PRAME基因呈正相关。3.小鼠骨肿瘤模型中PRAME表达水平对肺癌骨转移的影响通过X-Ray照射发现抑制PRAME基因组的骨侵蚀的现象明显强于对照组,荧光标记活体成像结果也更加明显,取出肿瘤通过免疫组化染色等方法检测,发现抑制组PRAME基因表达明显降低,同时E-cadherin蛋白表达水平也明显降低。研究结论肺癌骨转移肿瘤组织中PRAME的表达水平较正常肺组织及肺癌原位肿瘤组织低。下调PRAME表达水平可促进肿瘤细胞迁移和增值,E-cadherin蛋白在这一过程中起重要作用。