线粒体单倍型D4b1提高宫颈癌的风险:一个中国南方城市的病例对照研究

来源 :温州医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xypcs
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目的:  本研究旨在评估线粒体单倍型M和N特定多态性对中国南方温州地区宫颈癌流行性的作用。  方法:  在温州中心医院从2013年1月到12月之间住院的150名无关联的宫颈癌患者(平均±标准差年龄58±13.17岁,年龄范围33-84岁);根据组织学病理部门确认诊断为宫颈癌;按照英国癌症研究组织规定的分类标准,宫颈癌的严重程度分级为Ⅰ级,Ⅱ级和Ⅲ级。同样选择在该医院体检的214名年龄、性别和地域匹配的正常人作为对照组(平均±标准差年龄55.63±9.49岁,年龄范围30-84岁),排除其他已知的退化性疾病包括癌症,糖尿病和高血压。所有纳入研究者抽取外周静脉血2ml。从外周血使用SDS-裂解液提取染色体DNA。设计引物为 L9967F:5-TCTCCATCTATTGATGAGGGTCT-3, H10858R:5-AATTAGGCTGTGGGTGGTTG-3。利用170-9703 PCR热循环仪器(Bio-Rad,美国)使用PCR试剂盒(TaKaRa,日本)进行PCR。使用MiniBEST DNA片段提纯试剂盒Ver.3.0(TaKaRa,日本)提纯,随后用ABI Prism3730测序仪器采用桑格测序对单核苷酸多态性(SNPs)进行测序。这些SNPs是使用CodonCode对准器3.0.1(CodonCode公司,美国)参照校对后的剑桥标准序列(rCRS)比较序列获得。特定的mtDNA单倍型M或N通过与构筑的东亚mtDNA单倍型树上ND3和ND4L的特征性单核苷酸多态性对比确定。  结果:  1.宫颈癌患者mtDNA单倍型的分析  宫颈癌患者组单倍型M和N的频率,特定在mt.10398和mt.10400,与年龄,性别,地域都匹配的正常对照组相比没有显著改变(P=0.396)。同样,毗邻在mt.10398和mt.10400的单倍型R9,F2和D5a的发生频率在宫颈癌患者组和正常对照组无差异。但是,单倍型D4b1在宫颈癌患者组的发生频率比正常对照组高的多(P=0.011)。此外,我们发现单倍型D4b1能够增加宫颈癌的风险主要是其子单倍型D4b1b,对应位点在10136G(P=0.027)。  2.宫颈癌患者的mtDNA单核苷酸多态性的分析  分析单独的单核苷酸多态性在宫颈癌上的作用主要显示在C10181T和A10136G,这种多态性只出现在宫颈癌患者组。我们发现包括与各种类型癌症相关的mt.10398多态性在内没有其他mtSNPs增加宫颈癌发病率。  3.mtDNA遗传背景对宫颈癌发展的影响  进一步了解mtDNA对宫颈癌发展的作用,将宫颈癌患者分为Ⅰ级组和Ⅱ/Ⅲ级组,结果显示两组间没有不同分布的mtSNPs。  结论:  我们发现在A10398G和10398G的分布上宫颈癌患者组和正常对照组之间无显著差异。同样的,我们也没有发现在宫颈癌患者组和正常对照组之间单倍型M/N分布相关的10398和10400的不同。最后,我们的研究十分明确的显示了C10181T,A10136G及其相关的单倍型D4b1/子单倍型D4b1b是宫颈癌发生的一个危险因素。  
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