新型高致病性H7N9亚型流感病毒的序列分析及致病性研究

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2013年3月,我国出现首例人感染H7N9亚型禽流感病毒的病例,这类病毒为低致病性禽流感病毒(LPAIV),随后在全国多地的禽群中发现。截至2017年4月30日,全国确诊1418例人感染H7N9病例,其中572例死亡。2017年1月,广东省疾病预防控制中心在两例人感染H7N9病例中分离到的病毒血凝素(HA)裂解位点位置插入了4个氨基酸KRTA,即由PKGR/G突变为PKRKRTAR/G,提示该病毒具有了对禽高致病性的分子特征。另外到目前为止,农业部共通报3起家禽中出现的高致病性H7N9疫情,分别发生在湖南永州(2017年3月19日)、河北邢台(2017年4月28日)和河南平顶山(2017年5月3日),三次疫情均导致大量蛋鸡的死亡,造成了巨大的经济损失。因此,急待开展对这类新型高致病性H7N9病毒序列分析和致病性相关研究。首先,对2013年至2017年间课题组分离出的128株H7N9亚型流感病毒进行了回顾性分析,鉴定出了7株具有高致病性分子特征的H7N9亚型禽流感病毒,HA基因裂解位点的表现形式为PKGKRTAR/G和PKRKRTAR/G两种,这两种表现形式的差异是由一个核苷酸的突变(G/A)进而导致一个氨基酸(G/R)的变化。然后,利用课题组分离测定的H7N9亚型流感病毒序列,结合GenBank和GISAID数据库中的序列,系统分析了新出现的高致病性H7N9亚型流感病毒的遗传演化特点。接着,根据HA基因的进化树分析结果,结合HA基因碱性氨基酸序列选取了3株H7N9病毒毒株,在SPF鸡、BALB/c小鼠和流感阴性白鸭上进行了致病性实验,所选取的3株代表毒株分别为:A/chicken/Guangdong/SW154/2015(PKGR/G,简称SW154)、A/chicken/Heyuan/16876/2016(PKGKRTAR/G,简称16876)、A/chicken/Huizhou/HZ-3/2016(PKRKRTAR/G,简称HZ-3)。SW154、16876和HZ-3的IVPI指数分别为0,2.92和3.0,表明16876和HZ-3病毒属于高致病性禽流感病毒。对SPF鸡致病性实验中,16876和HZ-3病毒攻毒组和同居组的鸡100%致死,进一步证明了这两类病毒对鸡的高致病性、高致死率以及较强的传播能力;而SW154病毒攻毒组、同居组和阴性对照组的鸡均未发现异常。与经典的弱毒株SW154相比,新型H7N9病毒16876和HZ-3毒株对BALB/c小鼠致病性增强,有10-20%小鼠死亡。综上所述,鉴于目前的严峻形势,亟待加强对这类新出现的高致病性H7N9病毒的流行病学监测和进一步开展致病性相关的研究,并加紧针对性疫苗的研发。
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