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肺炎克雷伯氏菌是一种常见的人畜共患病病原体,在临床上可引起人和动物多种疾病,对养殖业造成严重经济损失。目前,多重耐药肺炎克雷伯氏菌已引起人们的警惕和关注。噬菌体是一类侵染细菌的病毒,因其天然杀菌的特性,是最具前景的抗生素替代品和生物消毒剂。为进一步了解噬菌体以及噬菌体的临床应用,本研究筛选一株能裂解高黏表型多重耐药肺炎克雷伯氏菌的噬菌体,分析了其生物学特性并通过环境杀菌和体内实验评估了其临床应用效果。从广西某猪场分离到一株致病力较强的高黏表型多重耐药肺炎克雷伯氏菌,命名为GXKP-J05。以GXKP-J05为宿主菌,采用双层平板法筛选出了相对应的裂解性噬菌体,命名为v B＿Kpn P＿Bp5。为深入的了解噬菌体v B＿Kpn P＿Bp5,对其生物学特性和全基因组进行了分析。其噬菌斑清晰透明,周围无晕环,为典型的裂解性噬菌体。电镜观察显示该噬菌体头部呈廿面体对称,对角长度约为60nm,有一条长15nm左右的短尾,属于有尾噬菌体目,短尾病毒科。噬菌体一步生长曲线显示潜伏期为5 min,爆发期为40 min,爆发量为24 PFU/cell。最佳感染复数为0.001,能耐受50℃的温度,适宜的p H值为4.0～10.0。全基因组测序显示,噬菌体的ds DNA长度为43872 bp。经BLASTn分析显示,该噬菌体与建议划分的新噬菌体属(KP34 like virus)的肺炎克雷伯氏菌噬菌体v B＿Kpn P＿SU552A的同源性为94.06%(基因组覆盖率为94%)。RAST基因组分析表明,该噬菌体基因组较小,仅有52个ORFs,其功能蛋白的数量与其他噬菌体相对一致。此外,环境杀菌试验分别用噬菌体10~9PFU/m~2、等体积的PBS喷洒消毒肺炎克雷伯氏菌菌污染的地面。结果显示喷洒噬菌体组3 h后肺炎克雷伯氏菌计数为0 CFU/ml,表明噬菌体v B＿Kpn P＿Bp5在外界环境中具有杀菌效果。体内实验分别对细菌感染前、刚感染和感染后的小鼠(每组5只)进行腹腔注射2×10~8PFU/只噬菌体治疗。结果显示,能明显提高感染小鼠的存活率,在阳性对照组小鼠全部死亡时,感染前注射组和同步注射组的小鼠存活率均为100%,而感染后注射组的小鼠存活率为60%。各组小鼠肺部病理切片显示噬菌体治疗能有效的保护肺组织结构的完整性,减少渗出液,且噬菌体注射的越早对小鼠的治疗效果越好。综上所述,噬菌体v B＿Kpn P＿Bp5具有研制环境生物消毒剂的潜力,为净化养殖环境提供新思路,并且在防控和治疗肺炎克雷伯杆菌感染方面具有较好的应用前景。