金属硫蛋白突变体的构建、表达及工程菌对重金属的吸附

来源 :华中农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:candy0533
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本文以猴金属硫蛋白(mMT)为研究对象,采用PCR技术和同尾酶手段,构建了mMT的突变体,获得了金属硫蛋白α域单体(MTα)及二聚串连体(MTα2)、三聚串连体(MTα3)、四聚串连体(MTα4)、五聚串连体(MTα5)。表达并纯化了MTα,测定了表达多聚串连体的工程菌抗镉能力,以及镉、锌吸附能力。主要结果如下:1.构建了mMTα域表达载体,并用其转化大肠杆菌BL2l(DE3),表达、纯化后获得高纯度的MTα,其镉结合能力与理论值一致。2.结构预测显示,MTα、MTα2、MTα3的二级结构中,α螺旋依次增加,推测突变蛋白的疏水性增强,蛋白质三维结构稳定。MTα4、MTα5二级结构中,α螺旋数目减少,尤其是MTα5,其α螺旋几乎完全遭到破坏,疏水性大为降低,这可能造成蛋白质空间结构的不稳定性。3.构建了表达mMTα域多聚串连体的工程菌,获得了表达二聚串连体(MTα2)、三聚串连体(MTα3)、五聚串连体(MTα5)的工程菌(MTα2/BL21、MTα3/BL21、MTα5/BL21)。4.0.5 mmol/L Cd2+时,对照菌生长受到严重胁迫,工程菌表现出一定的抗性,对MTαn/BL21,(n=2,3,5)生长几乎没有胁迫。1.0 mmol/L Cd2+时候,MTα5/BL21表现出较强耐受能力。5.在低浓度Cd2+(0.067 mmol/L)时,表达有野生型猴金属硫蛋白的工程菌(MT/BL21)表现出较高的镉吸附能力(0.0615 mmol/mg细胞干重),随着镉浓度的升高,这种趋势更加明显,在镉浓度为0.268 mmol/L时,MT/BL21镉吸附量为0.093mmol/mg细胞干重,是对照(pGEX-2T/BL21)的2.5倍。0.5 mmol/L Cd2+时,工程菌对镉的清除能力明显高于对照,其中清除能力最强的是MTα3/BL21(76%),其次是MTα2/BL21(72%)。6.MT/BL21对锌吸附能力显著提高(0.118 mmol/mg细胞干重),而转化有MTα串连突变体基因的工程菌对锌的吸附能力没有明显提高。
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