研究背景及目的：　　据世界卫生组织（WHO）规定，育龄夫妇正常性生活一年以上，并且在未采取任何避孕措施的条件下，仍然无法生育的称为不孕症。虽然成功受孕但因各种原因导致流产、死胎而依然不能使婴儿最终存活的也一并称为不育症。一般把婚后2年以上由于男性方面原因造成女方不孕者称为男性不育症。近年来由于环境污染以及遗传因素的影响，不孕不育症已经与心血管疾病、肿瘤并列成为影响当今人类生活健康的三大主要疾病。近来，越来越多的育龄夫妇遭受到男性不育的困扰。据有关资料统计，已婚夫妇中有10％—15%的夫妇为不孕不育，其中由男性原因引起的约占30%—50%。男性不育症主要表现在生精障碍方面，病因多且复杂，如外伤、梗阻、睾丸发育不良、生殖系统感染、内分泌或免疫性疾病、服用激素药物或肿瘤药物、不良生活习惯、环境毒物以及遗传因素等等。另有少数导致男性不育的原因并不能给出基于分子水平的合理解释，被称为特发性男性不育，这其中约有50﹪是由遗传因素造成的。大量研究发现，男性不育与染色体异常、Y染色体微缺失及相关基因的突变均有很高的相关性。　　1976年，Tiepol等人发现存在Y染色体长臂远端微缺失的现象有6例患者，继而猜测在该区域可能存在控制精子发生的相关基因，因此将此区域命名为无精子症基因即AZF。更多的学者随后投身于对该区域的研究从而得出结论AZF区微缺失与生精障碍有重要关系。基于这一结论，如欲研究基因多态性与男性不育的相关关系，须先排除Y染色体AZF区微缺失的影响。　　L.Lazaros等对希腊人群进行研究发现雄激素受体基因的(CAG)n和SHBG（Sex hormone binding globulin,SHBG）基因的(TAAAA)n的重复数目在精子的发生中起着很大的作用，并进一步影响了精子的存活数以及存活质量。Mohammad Reza Safarinejad等研究发现SHBG基因与男性少弱精症有关。　　有研究在人类肝母细胞瘤细胞中进行体外瞬时转染试验发现携带较长重复等位基因(TAAAA) n的个体SHBG水平显著低于携带较短重复等位基因的个体，说明SHBG启动子的转录活性可能与(TAAAA) n重复数有关。Cousin[40][13]等人的研究指出，在法国多毛女性人群中，含有6个的患者与含有9个的患者相比，其血清的 SHBG水平较高，而含有8个的患者其血清的 SHBG水平位于前两者之间。Vanbillemont等也进行了研究，得出结论携带6次（TAAAA） n重复数的男性血清SHBG浓度比未携带者血清中SHBG的浓度高，并且指出纯合子比杂合子拥有更高的血清SHBG水平。在2007年Ferk等人经过大量研究也得出相似的结论：无论是多囊卵巢综合征患者还是健康成年女性，凡携带长等位基因（TAAAA）n的个体都表现出较低的SHBG水平。　　近年来许多研究表明，SHBG水平和男性不育有相关性。Wood等研究发现，不同长度（TAAAA）重复等位基因携带者的SHBG水平不同，继而影响男性精子发生和精液质量；Eriksson AL等把（TAAAA）重复数作为连续参数进行分析，研究表明在青年及老年男性中，（TAAAA）等位基因重复数和男性SHBG水平间存在相关性；2008年L.Lazaros等人报道指出SHBG基因多态性与男性精液质量有关。2010年Reza Safarinejad等人发现，SHBG基因（TAAAA）n多态性和Asp327Asn多态性与循环血液中SHBG的浓度及自发性男性不育有相关关系。而关于SHBG基因启动子中（TAAAA）n重复多态性与男性不育的相关性研究国内未见报道。　　故本课题拟对SHBG基因启动子（TAAAA）n多态性进行研究，分析其多态性与河南汉族人群男性不育是否存在相关关系。首先本课题为研究对象进行Y染色体AZF区域微缺失检测，采用多重聚合酶链式反应（Mutiplex Polymerase chain reaction Mutiplex PCR）技术，以AZF微缺失作为排除标准，对纳入的研究对象利用变性聚丙烯酰氨凝胶电泳技术对河南汉族人群SHBG基因的启动子（TAAAA）n多态性进行相关分析，拟找出其多态性在河南汉族人群中的分布情况，进而得出其与男性不育的相关性，能更好的为男性不育的临床检测与治疗提供准确可靠的理论依据。　　研究对象：　　1．病例组　　采集自2013年1月—2013年6月因不孕不育问题来郑州大学第一附属医院生殖中心及检验科门诊就诊的288例患者，年龄在22-45岁（平均年龄32.4±6.4岁）的男性。经过正规检查，排除肝脏肾脏疾病、慢性病如糖尿病高血压、睾丸因素疾病、染色体异常及缺失、内分泌系统疾病、生殖器相关疾病等病症以及服用抗肿瘤药物等情况,要求患者均经过至少两次精液常规检查，并且是按照标准化操作规程进行的,经确诊为无精子或少精子病的患者作为研究对象(精子密度＜20×106/mL)。所有受试者均为河南地区汉族人，且同意并已签署知情同意书。　　2．对照组　　随机抽取正常生育至少一个孩子并且身体健康无肝肾、糖尿病、高血压等的男性血液样本259例做为正常对照组，年龄在24-45岁（平均年龄32.8±6.7岁），对象均为河南地区汉族人，且均已签署知情同意书。另以无菌双蒸水作为空白对照。　　研究方法：　　采用常规经典的酚-氯仿法，分别从病例组的血液和对照组的血液中提取DNA，PCR扩增目的片段，进行Y染色体微缺失检测，再用6%的聚丙烯酰胺凝胶电泳对无缺失样本的目的片段进行SHBG基因启动子（TAAAA）n基因型的检测，观察并记录分析。　　统计学处理：　　采用χ2检验和独立样本t检验，比较病例组和对照组由于基因型、等位基因频率等相关因素在其中的分布差异性而男性不育的相关危险度则采用比值比(odds ratio,OR)及其95%可信区间(confidence interval，CI)来表示并严格控制其他干扰因素因素对结果的影响。使用HWE软件检验Hardy-Weinberg平衡对于对照组和病例组的基因型分布是否足以用样本代表总体。所有统计检验均为双侧概率检验,概率以P＜0.05作为显著性差异指标。统计软件为SPSS17.0和HWE1.20。　　结果：　　1．病例组288例中检测出35例Y染色体微缺失，缺失率为12.15%。对照组中未检出。　　2．检测到(TAAAA)5～10次重复6个等位基因及5/5、5/6、5/7、5/8、5/9、6/6、6/7、6/8、6/9、6/10、7/7、7/8、7/9、7/10、8/8、8/9、8/10、9/9、9/10、10/10等20种基因型　　3．在病例组和对照组中，样本的SHBG基因型频率都符合Hardy-Weinberg平衡，表明选取样本可靠，其具有很好的代表性。　　4．SHBG基因启动子(TAAAA)n多态性中等位基因频率差异在病例组和对照组的对比中具有统计学意义（P＜0.05）。　　5．SHBG基因启动子(TAAAA)n多态性研究中，当 n=5、6、7、10时，两组间差异无统计学意义（P＜0.0083）;n=9为危险因素（P＜0.0083，OR=1.68，95%CI：1.30-2.17）；n≥9时显著增加了不育的风险（P＜0.01，OR=1.80，95%CI：1.41-2.30）。　　小结：　　1．SHBG基因启动子(TAAAA)n多态性研究，n=9可能是河南汉族人群中男性不育的危险因子。　　2．SHBG基因启动子(TAAAA)n多态性研究，n≥9时可能显著增加了河南汉族人群男性不育的风险　　3．河南汉族男性SHBG基因启动子(TAAAA)n多态性与男性不育可能有一定关联性。