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研究背景严重烧伤患者经常会出现皮肤缺损,组织水肿,液体渗出,休克和器官功能障碍,甚至可能危及生命。烧伤后微血管通透性增加,微循环障碍,局部组织水肿甚至出现低血容量性休克,其病理基础是血管内皮屏障的结构损伤和功能损伤。间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)是一种具有较强增殖能力和多向分化潜能的干细胞。MSCs来源广泛,主要分布在骨髓、脐血、脐静脉内皮层、脂肪、外周血和肌肉等组织。由于间充质干细胞具有自我更新、自我繁殖、易保存、多向分化、较强的分泌功能等特点,已经成为治疗多种临床疾病的种子细胞。其中,胎儿真皮间充质干细胞(Fetal dermal mesenchymal stem cells,FDMSCs)是取自不携带遗传疾病且未应用任何药物的健康孕妇意外流产胎儿皮肤的一种多功能干细胞,具有MSCs所有功能特性。与其他组织来源的干细胞相比,FDMSCs具有免疫原性低、增殖能力强、自我更新能力强、促进组织再生和归巢于损伤组织等优点。但FDMSCs在烧伤后引起的微血管通透性增高,微循环障碍的治疗方面还未见文献报道。目的通过研究 FDMSCs 的条件培养基(conditioned media of FDMSCs,F-CM)对烧伤诱导的微血管通透性的影响,探索FDMSCs相关疗法治疗烧伤后微血管通透性及微循环障碍的可行性。方法从胎儿的皮肤组织中提取FDMSCs并制备F-CM。人微血管内皮细胞系1(HMEC-1)从ATCC获得。体内实验中,采用水浴烫伤法(54℃,25 s)制备小鼠背部深Ⅱ度烫伤创面,在创面区域分别皮下注射200μL空白培养基和不同浓度的F-CM(0.5×CM,1×CM,2×CM),24h后采用异硫氰酸荧光素-葡聚糖(FITC-Dextran)法血管内循环方法测试F-CM对小鼠体内血管通透性的影响。体外实验中,分别用空白培养基、烧伤血清、不同浓度的F-CM(0.5×CM,1×CM,2×CM)处理HMEC-1后,检测以下指标:①内皮细胞通透性:采用FITC-Dextran体内循环法检测体内通透性系数;②烧伤血清诱导内皮细胞模拟烧伤环境,采用transwell小室,计算内皮细胞通透性系数,确定烧伤血清干预内皮细胞的最佳作用浓度和最佳作用时间;③内皮细胞增殖试验:采用CCK-8的方法;④内皮细胞通透性相关蛋白表达:采用Western blot检测钙粘连蛋白(VE-cadherin)和咬合蛋白(Occludin)的表达;⑤细胞免疫荧光检测内皮细胞蛋白表达:采用细胞免疫荧光检测细胞间粘附连接VE-cadherin和内皮细胞纤维状肌动蛋白(F-actin)的表达情况。结果①体内通透性检测:随着F-CM干预浓度的增加,降低血管通透性作用更加明显;②烧伤血清对内皮细胞通透性的影响:烧伤血清浓度越高,作用时间越长,增加内皮细胞血管通透性作用越明显;③F-CM可以促进为微血管内皮细胞的增殖,提高血管周围细胞密度;④F-CM对内皮细胞通透性相关蛋白表达的影响:随着F-CM浓度的增加,Western blot检测Occludin和VE-cadherin蛋白表达增加;⑤免疫荧光检测内皮细胞F-actin和细胞间粘附连接VE-cadherin的表达增加。结论通过一系列实验,结果表明F-CM可以通过增加Occludin和VE-cadherin的蛋白表达并恢复内皮细胞骨架F-actin的重塑来降低烧伤诱导的微血管高通透性,从而减少烧伤引起的血管内液体渗出,局部组织水肿,从而预防低血容量性休克的发生。