论文部分内容阅读
本文简介了微卫星DNA的发展历程,微卫星位点的分离和分析方法及其在水产养殖中的应用,并对微卫星作为遗传标记的优缺点进行了探讨,同时,运用经典分子生物学方法和磁珠富集法分别进行了皱纹盘鲍、刺参微卫星DNA的分离筛选。1皱纹盘鲍微卫星DNA的筛选
运用经典分子生物学方法,即构建基因组文库,通过放射性[γ-32P]标记的探针进行杂交筛选,共得到102个皱纹盘鲍微卫星DNA序列,其中完美型60个(占58.8%),非完美型29个(占28.4%),复合型13个(占12.7%);重复次数在3-10次的比例最高,为48个,重复次数最多的达到104次;重复核苷酸中以双核苷酸和四核苷酸较多,分别为82个(占80.4%)和14个(占13.7%),其中双核苷酸又以(AC/TG)n最常见,占81.4%。根据得到的皱纹盘鲍微卫星DNA保守序列,用PrimerPrimer5软件设计出81对引物。2刺参微卫星DNA的筛选
磁珠富集法是一种快速、高效的分离微卫星分子标记的方法。本研究通过磁珠富集的方法分离刺参的微卫星分子标记。将刺参基因组DNA经Sau3AI酶切,回收纯化400~900bp片段,连上接头,构建“基因组PCR文库”。用生物素标记的简单重复序列(CA)15作探针与其杂交,杂交复合物结合到包被有链霉亲和素的磁珠上,经一系列的洗涤过程,去除磁珠表面不含有微卫星的片段。