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板栗(Castanea mollissima BL.)是我国的名优特干果,果实营养丰富,是重要的木本粮食树种。但目前板栗良种繁育主要以实生嫁接为主,繁殖系数较低。而植物组织培养可以在短期内获得大量性状相对一致的苗木,同时也是板栗品种遗传改良的技术基础。因此,有关学者开展了板栗植物组织培养研究,并对其不定根发生机理进行了探讨。但板栗组织培养仍然存在生根率低、继代时间长等问题,需要进一步深入研究。本文在前人试验的基础上,仍以燕山红栗2-3月实生苗的茎段为外植体进行组织培养,对外植体灭菌方法进行了改进,并对继代增殖培养中存在的问题进行了分析。采用双向电泳技术研究了板栗组培不定根发生不同时期的蛋白质变化。结果表明：以茎段为外植体,采用5%的NaCIO (?)寸外植体进行表面灭菌20min可以替代有剧毒的升汞,并能快速获得无菌体系。板栗继代培养过程中存在茎尖坏死现象,第2代时坏死率为19.5%,到第7代时已经达到37.1%。随着继代次数的增加,茎尖坏死现象越来越严重。由前人的研究结果推断板栗不定根发生分为3个阶段,即第0-3d,根原基诱导阶段；第3-7d,根原基形成阶段；第7d之后,不定根伸长生长阶段。本论文分别采集3个时期的板栗组培微枝,采用双向电泳(2-DE)技术,探讨了板栗不定根发生不同时期的蛋白质变化。确定了板栗蛋白质提取的最佳方法为改良的TCA/丙酮沉淀法,建立了适宜板栗组培生根茎段的双向电泳方法,获得了分辨率和重复性均较好的双向电泳图谱。用ImageMaster软件分析,分析获得有明显差异的蛋白点信息,结果表明：(1)不定根发生过程中,蛋白质总数基本保持不变,但是表达量有下调；(2)从根原基的诱导到根原基形成期间,上调的蛋白质点有5个,下调的9个；新增蛋白质点6个,消失9个；(3)从根原基形成到不定根分化生长期间有4个蛋白质点表达量增加,7个减少；新增蛋白质点9个,消失8个。选取在板栗不定根发生3个阶段特异表达的6个蛋白质点进行MALDI-TOF-MS分析,测定其肽质量指纹图谱,在NCBI数据库中搜索其可能的同源性蛋白,初步鉴定这些蛋白为：组成光系统Ⅱ放氧复合体的OEE蛋白1,与卡尔文循环密切相关的Rubisco和SBPase等,这些蛋白大部分与植物光合作用密切相关,可能间接影响板栗的不定根发生,其作用机制还需要进一步研究。