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Dot/Icm Ⅳ型分泌系统是嗜肺军团菌侵染过程中最主要的毒力系统。利用该分泌装置,嗜肺军团菌向宿主细胞转运了数量众多的效应因子,协助细菌胞内生存、增殖和逃逸。Dot/Icm Ⅳ型分泌系统跨膜通道由DotC,DotD,DotH,DotG,DotF五个蛋白组装而成。其中,DotH在两个脂蛋白DotC和DotD协助下定位到外膜,共同组装成为外膜层复合物。为了通过晶体学方法Dot/IcmⅣ型分泌系统外膜层复合物的结构,本研究利用大肠杆菌表达系统,表达了 DotH(101-360)和DotH(123-360)两个蛋白截短片段。经过亲和层析、离子交换层析和分子筛层析等多个纯化步骤,得到了纯度较高、性质均一且适合结晶的蛋白样品。经过结晶条件筛选和优化,最终得到了达到X射线衍射要求的DotH(101-360)蛋白晶体。本研究探索了 一系列DotH蛋白纯化、结晶及优化的方法,有助于进一步解析DotH的晶体结构和阐明Dot/Icm Ⅳ型分泌系统外膜层复合物的分子机理。Ⅲ型分泌系统存在于许多重要致病菌中,如痢疾杆菌,伤寒沙门氏菌,百日咳杆菌,霍乱弧菌和致病性大肠杆菌等。在感染过程中细菌借助Ⅲ型分泌系统向宿主细胞转运了大量效应因子阻断或调节宿主细胞信号通路。因此,对Ⅲ型效应因子的清楚认识是理解致病菌病理机制的基础。本研究通过建立酵母模式生物体系,将致病菌的Ⅲ型效应因子在酿酒酵母细胞中异源表达,发现紫色色杆菌的效应因子CopA对酵母生长具有显著的抑制作用。经过二级结构预测和序列保守性分析,我们鉴定了 CopA功能必需的保守氨基酸位点。此外,我们也验证了霍乱弧菌效应因子VopK和肠道出血性大肠杆菌效应因子EspV对酵母细胞的毒性作用,但是并没有观察到肠道出血性大肠杆菌效应因子EspO和NleA,百日咳杆菌效应因子BteA及痢疾杆菌新型毒力因子CP0014引起的酵母表型特征。本研究利用酵母模式生物研究体系探究了多个致病菌效应因子的潜在功能特性,为进一步阐明这些效应因子的作用机制提供了重要信息。