【摘 要】
：
目的：利用PCR技术对hBD-3基因进行定点改造，将突变后的基因连接入pGEX-4T-1表达载体进行表达以及抗菌活性的初步检测。 方法：提取人正常包皮组织的总RNA，采用RT PCR方法获
论文部分内容阅读
目的：利用PCR技术对hBD-3基因进行定点改造，将突变后的基因连接入pGEX-4T-1表达载体进行表达以及抗菌活性的初步检测。
方法：提取人正常包皮组织的总RNA，采用RT PCR方法获得hBD-3的cDNA全长序列，并将其克隆至pUC-18载体中，在大肠杆菌DH5α中扩增。酶切和PCR鉴定及基因测序表明，所获得的序列与GeneBank中报道的序列一致，无碱基缺失或突变。在此基础上，重新设计突变引物引入一个突变点，通过重叠延伸法进行两次PCR扩增，使hBD-3第27位氨基酸的密码子由GAG突变为CGA，将突变后的片段克隆入pGEX-4T-1质粒中，转化至大肠杆菌BL21，对鉴定含有目的片段的克隆进行测序。在0.5mM IPTG诱导下，BL21中表达hBD-3-27-GST融合蛋白。蛋白以包涵体形式存在，经超声裂解，变性和复性后过Glutathione Sepharose 4B层析柱，再经凝血酶处理使重组的hBD-3-27从hBD-3-27-GST融合形式中解离下来。活性分析表明hBD-3-27具有抗菌活性。
结论：获得突变型hBD-3基因，构建了表达载体，融合蛋白得到表达，酶切和亲和
层析得到活性hBD-3-27，为进一步深入研究和开发hBD-3-27的功能奠定基础。
其他文献
目的 探究糖尿病合并心脑血管病患者运用临床内科治疗的临床价值.方法 选取于2017年3月至2019年1月本院收治的糖尿病合并心脑血管病患者98例,根据随机分组原则分为观察组(临
钛酸锶钡的介电常数可以随外界电场而变化，在相控阵天线，移相器及可调谐滤波器等方面具有广阔的应用前景。钛酸锶钡还可以用于高梯度加速器，包括直线对撞机的大功率微波开关，电控移相器及介质加速器结构的调谐层。尽管纯钛酸锶钡的调谐率很高，但存在介电常数大，介电损耗高的缺点，大的介电常数会导致阻抗匹配困难，因而必须降低钛酸锶钡的介电常数和介电损耗而保持较高的调谐率。形成铁电-介电复合物是降低钛酸锶钡的介电常数
目的 探讨人性化护理管理对小儿糖尿病预后影响.方法 将我院在2018年9月至2019年9月接收的90例小儿糖尿病患儿作为研究对象,分为对照组与观察组,各45例.观察组患儿实施人性化
目的 探析糖尿病性肾功能衰竭患者在血液净化中开展心理护理价值.方法 选取2018年10月至2019年10月我院100例糖尿病性肾功能衰竭血液净化患者,随机分组.对照组50例施以常规护
目的 探讨产房护理安全管理在妊娠合并糖尿病产妇分娩中的应用效果.方法 对98例妊娠合并糖尿病孕产妇予以选取,入院时间为2018年7月-2019年8月,比较对照组59例(常规产房护理
目的 分析早期肠内营养支持护理对老年食管癌合并糖尿病患者的护理效果.方法 以2018年1月-2018年12月来我院就诊、治疗的40例老年食管癌合并糖尿病患者为研究对象,随机分为对
工业生产过程控制仪表经历了从模拟技术向数字技术、从现场控制到集中控制再到分散控制的转变,正朝着智能化、网络化的方向发展。针对过程控制仪表的监测经历了从现场监测到
数字位移传感器由于其信号的易处理特性,被广泛的应用于各个方面。对数字位移传感器的特性研究以及后期数据处理上,传统的方式是通过单片机来实现。由于单片机的接口固定,管
目的 分析中药抗癌2号方加减和高强度聚焦超声的联合应用对原发性肝癌的临床治疗效果.方法 本文的研究对象为60例原发性肝癌患者,病例的采集时间从2017年3月至2019年3月.将上
目的 分析不同强化方案治疗肺癌患者初诊2型糖尿病效果.方法 选我院肺癌且初诊为2型糖尿病患者171例,随机分成甲组(单纯胰岛素治疗)、乙组(二甲双胍与甘精胰岛素联合治疗)、