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鸭疫里默氏杆菌病是家鸭、火鸡和多种其它鸟类的一种接触传染性疾病。该病呈世界范围分布，已在几乎所有的集约化养鸭生产的国家发现。该病的发病率和死亡率较高，已成为目前危害世界各国养鸭业最为严重的传染病之一，给养鸭业造成了巨大的经济损失。到目前为止，关于鸭疫里默氏杆菌的分子生物学研究资料较少，国内外尚无关于血清1型RA基因文库的研究报告。由于目前我国鸭疫里默氏杆菌病流行的血清型以1型出现频率最高，因此我们以血清1型RA菌株为材料构建基因文库，以期筛选出相应的抗原基因，为RA基因工程疫苗研究奠定基础，为该病的诊断与流行病学监测提供高纯度的特异性抗原。 本研究以血清1型RA CH-1株为材料，酚氯仿抽提基因组DNA。采用限制性内切酶Sau3A Ⅰ进行部分酶切消化，首先小量酶切优化确定酶切时间和作用浓度，然后在小量酶切预试验基础上扩大反应体系进行酶切，采用试剂盒纯化回收1.0kb-6.5kb片段，将其用T4 DNA连接酶与经BamH Ⅰ酶切并去磷酸化的ZAP Express载体进行连接，用噬菌体包装蛋白包装。经测定包装滴度为5.23×10~6pfu／ml，蓝白斑筛选重组率为96.8％，表明已成功构建血清1型RA基因文库。 在成功构建RA基因文库的基础上，采用兔血清对文库进行免疫筛选，获得了3个阳性斑，并对其中一个进行了复筛及纯化，对该阳性斑进行体内删除，对获得含插入片段的噬菌粒进行酶切鉴定正确后进行测序，并将该序列递交GenBank，获得登录号为DQ151838。 通过核酸序列相似性搜索比对、ORF分析、基因预测，初步判定ORF1110读框是一个完整的有意义ORF，是与荚膜多糖蛋白相关的基因；ORF1155读框则与外膜蛋白相关，但起始密码子上游未发现RBS(可能与起始密码子上游序列长度太短有关)，因此无法判断是否是一个真正的ORF；而ORF2141读框囿于序列长度只有起始密码子而没有终止密码子，因此并不是一个完整的ORF，有必要通过试验来补齐这段序列再进行分析；通过蛋白质序列搜索比对、亚细胞定位、跨膜区、疏水性预测分析，进一步证实ORF1110与荚膜多糖生物合成密切相关，而ORF1155则与包括外膜蛋白、表面抗原的多个蛋白家族相关；采用软件进行抗原性预测分析表明ORF1110