目的目前由于对B急淋的生物学特性有更深入地了解及治疗手段的提高,儿童及成人的B急淋都有较高的缓解率,但有相当一部分患者容易复发,尤其是成人。B急淋病例中约30%涉及PAX5的突变,其对于成人的疾病进展的影响尚无深入研究,但有研究表明在儿童群体中,COX分析PAX5缺失可作为DFS一个独立的危险因素。在本篇研究中,我们用基因编辑技术在Raji细胞系中构建了PAX5单倍体敲除的细胞模型,通过观察此细胞模型的生物学功能的改变,从而探讨PAX5在B细胞肿瘤中可能发挥的作用机制。方法本研究中,我们针对人类PAX5基因,通过分析其功能域,挑选合适的位点,利用CRISPR-cas9基因编辑工具构建工具质粒。将质粒转染入人类Burkitt淋巴瘤细胞株Raji中,利用g RNA的靶向识别结合及cas9蛋白的切割效应,实现了基因敲除。经过细胞单克隆分选和一系列测序工作,挑选出符合条件的细胞株。将突变细胞株扩增后,利用RT-PCR和Western Blot方法检测与野生型细胞相比,其在PAX5mRNA和蛋白水平的表达变化,观察其在体内体外的生物学效应变化,初步探讨PAX5缺失引起肿瘤发生发展及影响疾病预后的可能的作用机制。结果构建出对人的PAX5有较强切割效应的CRISPR-cas9工具质粒,获得超过20株PAX5单倍体突变的Raji细胞克隆株。突变克隆在mRNA和蛋白表达水平上均较野生型下降。PAX5单倍体突变的Raji细胞株与野生型相比,基础凋亡无明显改变,增殖能力减弱,细胞周期进展延缓,对药物的敏感性降低,在体内的成瘤能力减弱。结论利用第三代基因编辑技术CRISPR-cas9成功构建出的遗传背景清晰、同源对照的Raji细胞模型,方法简便易行,敲除结果可靠。PAX5单敲的Raji细胞克隆与野生型相比,增殖减慢,周期进展慢,对药物的敏感性降低,其可能是PAX5敲除后,通过促使部分细胞进入休眠状态,肿瘤细胞抗药性增加,逃避常规化疗药物攻击,成为复发及转移的根源,并导致不良预后。