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研究背景目前,在全球范围内,卵巢癌是妇科癌症死亡的主要原因,大多数发病隐匿,且缺乏准确有效的早期诊断方法,70%-80%患者一经确诊已为晚期。到目前为止,临床治疗卵巢癌的标准方式是肿瘤细胞减灭术和术后以铂类和紫杉醇为基础的联合化疗,然而由于患者多药耐受的存在,卵巢癌的5年生存率仅为30%。多药耐受成为成功治疗卵巢癌的主要障碍,为了提高卵巢癌的预后,多药耐受的机制研究成为关键。近年来,微小RNA (microRNAs)参与肿瘤细胞对化疗耐受机制的调节的研究正成为热点。就卵巢癌而言,已报道的与化疗耐受相关的microRNAs包括miR-136[2], miR-490-3[3], miR-128[4], miR-449a[5], miR-130b[6]和 miR-370[7]等。而最近有研究 表明,miR-193a-3p参与肝细胞肝癌对5-氟尿嘧啶的耐受机制调节。到目前为止,对miR-193a-3p是否参与卵巢癌多药耐受的机制研究尚未报道,该研究通过MTT法筛选多药敏感卵巢癌细胞系和多药耐受卵巢癌细胞系,qRT-PCR检测上述两种卵巢癌细胞系中miR-193a-3p的表达情况,探讨miR-193a-3p与卵巢癌细胞系多药耐受的关系及其意义。与此同时,通过microRNAs下游靶点预测网站WWW.microRNA.org预测其可能调节生长抑制蛋白5 (inhibitor of growth protein 5,ING5).有研究[9]表明,在体内ING5能够和p300和p53相互作用,在结直肠癌细胞中,其过表达能够诱导细胞凋亡。到目前为止,对有关ING5的功能研究很少,故通过Western blot法检测卵巢癌细胞系中ING5的表达,探讨ING5在卵巢癌细胞系中的表达与对顺铂诱导细胞凋亡敏感性之间的关系及其意义。目的探讨miR-193a-3p在卵巢癌细胞多药物耐受中的表达情况及其意义,进一步分析其可能的下游基因生长抑制蛋白5 (ING5)在对顺铂不同敏感性的卵巢癌细胞中的表达情况及其影响。方法应用MTT法分析卵巢癌细胞系A2780、SKOV-3、HO8910、ES-2对5种化疗药物敏感性的差异并测定半抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,ICso)值；实时定量PCR (quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)法检测相对多药最敏感卵巢癌细胞系ES-2和相对多药最耐受卵巢癌细胞系SKOV-3中miR-193a-3p的表达差异；在低表达miR-193a-3p的相对多药最敏感卵巢癌细胞系ES-2中转染miR-193a-3p mimic,qRT-PCR法检测转染效率,MTT法检测转染后卵巢癌细胞系ES-2对上述化疗药物敏感性的改变。与此同时,通过microRNAs下游靶点预测网站WWW.microRNA.org预测miR-193a-3p可能调节生长抑制蛋白5 (inhibitor of growth protein 5,ING5), Western blot法检测ING5蛋白在卵巢癌细胞系A2780、SKOV-3、HO8910、ES-2中的表达水平;并在A2780细胞中应用ING5 siRNA沉默ING5基因,Western blot法检测沉默效率,MTT法检测转染后A2780细胞对顺铂敏感性的改变。结果1)miR-193a-3p在相对多药最敏感卵巢癌细胞系ES-2中表达最低,而在相对多药最耐受卵巢癌细胞系SKOV-3中表达最高(P<0.01)；2)在ES-2细胞中转染miR-193a-3p mimic后,使其对化疗药物(紫杉醇,Pa；卡铂,Kp；多西他赛,Dt)的耐受性增加(P<0.01)；3)A2780细胞对顺铂的敏感性最高,IC50值为(0.423 ± 0.020)μg/ml;而ES-2细胞对顺铂的敏感性最低,IC50值为(5.280 ±0.309)μg/ml (P<0.01);4)ING5蛋白在A2780细胞中表达最高,在ES-2细胞中表达最低(P<0.01)；5)ING5 siRNA显著降低A2780细胞对顺铂的敏感性(P<0.01)。结论miR-193a-3p可能参与卵巢癌细胞多药耐受机制的调节。ING5的高表达可能有利于提高卵巢癌细胞对顺铂的敏感性。ING5在卵巢癌细胞中可能是受到其它microRNAs的调节而非miR-193a-3p。