自主研发产物—斑蝥素酸镁的体内外抗癌活性研究及其机制

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目的:利用自主研发的斑蝥素酸镁进行体内外抗肿瘤实验,为斑蝥素酸镁的新药开发做前期准备工作。方法:1、采用磺酰罗丹明染色法(SRB法)检测不同浓度斑蝥素酸镁、斑蝥素、斑蝥素酸钠在体外对人肝癌细胞SMMC-7721、人肝癌细胞HepG2、人肝癌细胞Bel-7402增殖的抑制作用;2、倒置相差显微镜观察不同浓度斑蝥素酸镁、斑蝥素、斑蝥素酸钠作用于三种肝癌细胞后的细胞形态变化;3、流式细胞术检测斑蝥素酸镁对人肝癌细胞SMMC-7721细胞周期和细胞凋亡的影响;4、HE染色法、Hoechst33342染色观察斑蝥素酸镁对人肝癌细胞SMMC-7721细胞形态的影响;5、透射电镜观察斑蝥素酸镁作用后人肝癌细胞SMMC-7721超微结构的变化;6、建立人肝癌细胞SMMC-7721裸鼠皮下移植瘤模型,实验随机分为生理盐水组、斑蝥素酸镁组、斑蝥素组、斑蝥素酸钠组,测定移植瘤体积、重量;7、HE染色法观察斑蝥素酸镁对人肝癌裸鼠皮下移植瘤组织形态的影响;8、透射电镜观察斑蝥素酸镁作用后人肝癌裸鼠皮下移植瘤组织超微结构的改变。结果:1、斑蝥素酸镁对SMMC-7721、HepG2、Bel-7402三株肝癌细胞的抑制作用好于斑蝥素和斑蝥素酸钠,其中斑蝥素酸镁对人肝癌细胞SMMC-7721的抑制作用最好;2、倒置相差显微镜观察:斑蝥素酸镁、斑蝥素、斑蝥素酸钠作用于三种肝癌细胞后,从低浓度组开始细胞数量减少,随药物浓度的增加细胞数量逐渐减少,有细胞皱缩,体积变小,变圆以及部分细胞破碎的现象;3、流式细胞检测结果显示:人肝癌细胞SMMC-7721在斑蝥素酸镁的作用下,G0/G1期细胞减少,G2/M期细胞增加,细胞出现G2/M期阻滞;细胞凋亡率随斑蝥素酸镁浓度加大而逐渐增加。凋亡率从空白对照组的0.8%增至IC50浓度时的11.3%;4、HE染色、Hoechst33342染色镜下显示:人肝癌细胞SMMC-7721出现凋亡细胞形态特征;5、透射电镜观察:细胞核异形、染色质聚集成团、边集,见凋亡小体;6、斑蝥素酸镁组肿瘤体积、重量显著小于生理盐水组(P<0.01),斑蝥素组、斑蝥素酸钠组肿瘤体积、重量与生理盐水组比较差异没有统计学意义;7、HE染色显示:斑蝥素酸镁组移植瘤细胞体积变小、胞浆固缩、嗜酸性变,细胞核固缩、碎裂。8、透射电镜可见斑蝥素酸镁组移植瘤细胞核膜基本消失、核染色质聚集成团等改变。结论:1、斑蝥素酸镁对肝癌细胞的抑制作用好于斑蝥素、斑蝥素酸钠;2、斑蝥素酸镁可明显抑制人肝癌裸鼠皮下移植瘤的增殖和生长;3、斑蝥素酸镁诱发人肝癌细胞SMMC-7721的凋亡与细胞分裂期阻滞有关。
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