基于Ⅰ型PKS基因的海芦笋内生真菌的分离鉴定及其次级代谢产物研究

来源 :南京农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:pfeiyuan2009
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I型聚酮合成酶(Polyketide synthases I, PKS I)是调节微生物次级代谢产物聚酮类化合物的关键酶,它催化合成许多具有抑菌、抗病毒、抗肿瘤等生物活性的化合物。因此,通过PKS I基因序列分析来预测微生物产生的化合物结构类型,成为研究内生真菌次级代谢产物的新型策略。利用“基因-酶-化合物”的对应关系,目标直接指向产生聚酮化合物的合成基因,大大提高发现聚酮化合物的效率。本研究以野生海芦笋为原料,采用表面消毒、PDA平板分离纯化得到内生真菌,通过PCR扩增筛选出四株含有I型PKS基因的菌株,编号分别为Salicorn1、Salicorn2、 Salicorn3、Salicorn4;通过系统发育树分析,表明这些菌株可能具有产生聚酮类化合物的潜力。利用形态学与分子生物学相结合的方法将四株菌株分别鉴定为:链格孢菌(Alternaria alternata)、黄曲霉(Aspergillus flavus)、圆弧青霉(Penicillium cyclopium)、杂色曲霉(Aspergillus versicolor)。对菌株Salicornl~Salicorn4分别进行静态发酵,将所得发酵液混合,通过溶剂分离萃取、浓缩蒸干、柱层析分离纯化从发酵产物中分离得到了四个纯化合物;利用核磁共振(1HNMR,13CNMR, HMBC, HMQC,1H-1HCOSY)、质谱MS等现代波谱技术,鉴定这些化合物结构分别是:1,5,9-trihydroxy-3,7-dimethylanthracen-10(9H)-one (1)、(3β,5a,8a,22E)-5,8-epidioxyergosta-6,9,22-trien-3-ol(2)、ditryptophenaline(3)、 Cerebroside C (4).
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